油酸型ARDS大鼠肺基因差异表达的研究.pdfVIP

ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(9)：1853—1856 · 1853 · [文章编号] 1000—4718(2009)09—1853—04 油酸型ARDS大 鼠肺基因差异表达的研究 刘秀珍 ， 刘 凤尬， 石增立 ， 张如意 ， 李 娜 ， 石 磊 (滨州医学院 药学院，基础学院；附属医院麻醉科，山东 滨州256603) [摘 要] 目的：用全基因表达谱芯片技术研究油酸型急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺基因的差异表达 并对其进行分析 ，以进一步阐明ARDS发病的分子机制。方法：采用雄性 sD大鼠舌下静脉注射油酸制作ARDS模 型，腹主动脉取血并进行血气分析 ，取肺组织 ，部分组织固定进行病理学观察 ，其余组织提取 RNA，经逆转录合成掺 人生物素标记的cDNA探针，然后与基因芯片(涵盖 27O44转录本 ，代表22012个基因)杂交，扫描芯片荧光信号 图像，用Sam3．0进行统计处理，用博奥生物分子功能注释系统V4．0进行功能分析。随机选择 3个差异表达基因， 用荧光定量 RT—PCR验证。结果：血气分析和病理学观察确定造模成功。芯片检测结果显示 ，在ARDS大鼠肺组 织中，表达上调 1．5倍以上的基因有73个，下调 1．5倍以上的基因有298个 ，其中代谢相关基因上调的有 1个，下 调的有29个 ；免疫相关基因上调的有3个 ，下调的有7个；信号转导相关基因上调的有2个，下调的有9个；神经相 关的基因上调的有3个 ，下调的有3个。结论：油酸型ARDS大鼠肺组织中发生了许多基因差异表达，这些基因涉 及代谢、免疫、信号转导和神经等方面的功能，为初步阐明ARDS的发病机制带来启示。 [关键词] 呼吸窘迫综合征 ；基因差异表达 [KEYWORDS] Respiratorydistresssyndrome；Genedifferentialexpression [中图分类号] R363 [文献标识码】 A 急性呼吸窘迫综合征 (acuterespiratorydistresssyndrome， RNA，通过异丙醇沉淀法浓缩RNA，并进一步采用NucleoSpin~ ARDS)是临床常见的危急重症疾病之一 ，作为全身炎症反应 RNAclean—up试剂盒 (Macherey—Nage1)对总 RNA进行过 的一部分，或是针对肺组织的特异反应 ，由多种细胞和因子 柱纯化，最后用分光光度计定量，甲醛变性胶电泳质检。 参与，伴随着多个基因和通路的表达，而研究这些基因和通 3 标记探针的制备 路对于阐明ARDS的发病机制具有重要意义”．2J。现已发现 以其中8只大鼠(每组 4只)肺组织 RNA分别为模板， 了许多这方面的基因，但我们还需要在全基因组水平上进行 按照博奥生物公司晶芯@cRNA扩增标记试剂盒提供 的步 检测，以全面研究 ARDS相关基因的表达。基 因芯片 (gene 骤，先合成双链 cDNA，然后再以cDNA为模板 ，用 T7enzyme chip或DNAmicroarray)作为一种高通量、高效能的筛选工 mix合成cDNA，再用 RandomPrimer反转录成cDNA，再用该 具 ，是研究基因表达的有效方法 j。本研究采用全基因表 引物进行Klenow酶标记 ，将对照组和ARDS组的cDNA探针 达谱芯片技术筛选ARDS大鼠差异表达基因，并分析这些基 分另1用 Cy5一dCTP、Cy3一dCTP(GEHeahhcareCat；No． 因的功能，以进一步探讨 ARDS发病的分子机制。 PA55021／PA53021)标记 ，标记产物用 PCRnucleoSpinextract IIkit(MN)纯化，抽干。 材 料 和 方 法 4 基因芯片杂交 1 动物分组及ARDS模型建立 所用芯片为博奥生物芯片有限公司的27KRatGenome 健康雄性清洁级SD大鼠(由山东绿叶制药有限公司提 Array芯片，共有约26962约70mer长度的Ol