兔肌源性干细胞的生物学特性及表型研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2006，22(11)：2239—2243 · 2239 · [文章编号] 1000—4718(2006)11—2239—05 免肌源性干细胞 的生物学特性及表型研究水 张金明， 何 涛， 梁伟强， 黄红军 (中山大学附属第二医院整形外科 ，广东 广州 510120) [摘 要] 目的：探讨兔肌源性干细胞 (MDSCs)的分离及特征和表型研究。方法：取 1．5月龄新西兰兔大腿 肌肉，采用差速贴壁分离Preplate技术，分别用Ⅺ胶原酶、dispase蛋白酶以及胰蛋白酶分步消化肌肉，并用差速贴壁 法分离晚期贴壁的细胞，流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学 以及Westernblotting等检测初步确定细胞表型。结果： 进行连续6d的差速贴壁分离。第3d开始得到较多量的圆形或短梭形细胞，簇样生长，体积明显小于骨骼肌细胞及 其它杂细胞，10d左右汇合，有极强的融合生长倾 向。细胞在汇合度 30％传代可较好地保持原形态 ，流式细胞仪 检测示MDSCs80％为 desmin ，70％为Bcl一2 ，95％为CD45一，免疫细胞化学定性示 desmin 。Westernblot— ting检测显示随着细胞的纯化，仅一SMA表达越来越弱。而细胞高汇合度 (50％)或低血清培养时极易融合成肌管 或肌细胞链，skeletalmyosin 。结论：MDSCs具有 desmin、Bcl一2高水平表达和 CD45极低水平表达的特性，具有多 向分化能力的MDSCs是组织工程研究的一种新型种子细胞。 [关键词] 肌源性干细胞 ；Preplate技术；肌，骨骼 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Isolationand characterizati0nofrabbitmuscle—derived stem cells ZHANGJin—ming，HETao，LIANGWei—qiang，HUANGHong—jun (DepartmentofPlasticandReconstructiveSurgery，TheSecond AffiliatedHo~italofSunYat—senUniversity，Guangzhou 510120，China) [ABSTRACT] AIM ：Toexplorethefeasibilityofisolationandcharacterizationofthemuscle—derivedstemcells (MDSCs)ofrabbits．METHODS：Skeletalmusclespecimenswereharvestedfrom rbabitsof1．5months．Preplatetech— niqueWas appliedtoisolateMDSCs，andflowcytometry(FCM)，immunocytochemistryandWesternblottingwereperformed tochraacterizeMDSCs．RESULTS：Theisolatingprocesscontained6consecutivedaysofdifferentiatedattachment．From day3，manyround—shape dorshortspindly—shape dceilsbegantoappera ，whichweremarkedlysmallerthna theskeletal musclecellsnadgrew toconfluenceafterabout10 dwithobvioustendencytofuse．Whenpassaged below confluenceof 30％ ，thesetellsmaintainedtheiroriginal shape well，andwereshown 80％ desmin ， 70％ Bcl一2 ，CD45一by