大肠杆菌中重组蛋白包含体的形成机制及其影响因素.pdfVIP

维普资讯 了哟7| ，一 ／ ， 《生物工程进展》t992，VaU 墨 ． 大肠杆菌中重组蛋白包含体的形成机制及其影响因素 李—溢 — r — ， 一 ． · 占 (军事医学科学院基础医学研究所) 摘 要 不同而有较大差异，如细胞质中的包含体形状 本 文介 绍 T近 年有关重 组蛋 白包含体 形成 规则，有清晰鲥边界，而周质间隙中的包含俸． 机 制的研究进展，探讨 了蛋 白性质 、温度 、分 则为无定形蛋白聚集物 。由于其不 溶 性， 子伴随物 等因素对 包含体 开j成的影响 ，从 蛋 白 用差速离心法即可将包含体与其他可溶性爱 自 折连的角度对包含体这一现 象进行 7分析，从 分开 。 而寿控制外源基因表连产物形成包含体提供理 迄今关于包含体的形成机制有很多假设， 论指 导。 但这些假设都无法对包含体的形成作出完满附 在外源基因表达系统中，太肠杆菌 以其周 解释。如有推测认为，由于细菌细胞质的还屠( 期短、操作简便 遗传背景较清楚等优点而得 环境，含有半胱氮酸的外源蛋白常常由于不能． 珥了广泛的应用，多种真核基因已成功地在大 形成正确的=硫键而产生非天然 构 象 “’，值 肠扦菌中获得高效表达。但是由于外源蛋 白常 有实验结果却表明，一些不含二硫键的蛋 白， 以非活性方式在细菌细胞质中聚集成不溶性的 如大肠杆菌sigma蛋 白，也能形成包 含 体，而 包含体 (inclusionbodies)，使利用大 肠 杆 含有2个二硫键的人生长激素分子则能 以溶解 菌生产活性蛋 白受到了一定限制。而且虽然 目 方式表达 ’。可见，虽然二硫键 与蛋 白的 稳 前所观察到的包含体大多形成于大肠扦菌中， 定有关，但=硫键的错配并非所有蛋白形成包 但有证据显示在其他表达系统中，当蛋 白表达 含体的原因。 量高至与大肠杆菌中相当时，也有形成包含体 最近有学者提出了以下假设，即蛋自的聚 的趋势。虽然包含体由于其不溶性易与其他可 集起源于肽链折送过程 中部分折迭的中阔体之 溶性蛋 白分离，但是这些非活性蛋 白必须经过 间的特异性错最聚合，而不是形成于成熟的无 变性、复性等处理后才能部分恢复其 天然 活 然态或完全解链的蛋 白 。这 一 假设 主 要 性 ，’而某些蛋 白，尤其是大分子蛋 白，其活性 建立在有关蛋 白折迭过程的认识基础上。_般 的恢复几乎是不可能韵，。因而包含体的形成为 地，大多数蛋白的折迭过程可分为 两 步 ’： 活性蛋 白的生产挺出了一个新 问题 。近年来有 U— I÷ N 关包含体的研究逐步深入到其形成机制及影响 第一步为解链态向中间体的转化，在毫秒 因素方面，这为控翩包含体形成、生产可擦性 级时间内快速形成特异性二级结构。第二步为 蛋 白提供 了重要 的理论依据 限速反应，为中间体形成特异性空间结构而达 一 、 包台体的形成机制 到天然状态的过程 。第二步反应伴随着大量盼 包含体在相差显微镜下常有折光性，故又