启动子DNA结合蛋白的研究策略.pdfVIP

成军.乙型和丙型肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学基础 14 1 启动子DNA结合蛋白研究策略 已足够了)但不能检查出精确的蛋白质结合位点.二 是特异性有时略差.这类方法包括酵母单杂交技术 噬 菌体表面展示技术等.第二类是细胞外法 即在体外用 巨立中,成 军,钟彦伟 重组的已知蛋白质与启动子DNA结合 该法特异性 好 且能够在启动子DNA序列上找到精确的蛋白质结 巨立中,成军,钟彦伟,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因 合位点 但这种方法效率低 操作复杂 一般不用 治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039 项目负责人:成军, 100039,北京市西四环中路100号,中国人民解放军第 于寻找未知基因及蛋白质 这类方法包括凝胶阻滞试 302医院传染病研究所基因治疗研究中心 全军病毒性肝炎防治研究重点实 验室. cj@ 验(gel retardation assay)DNase足迹试验(DNase 电话: 010真: 010 收稿日期: 2003-06-24接受日期: 2003-07-16 Foot-printing assay )等.研究者可根据研究目的选用其中 一种或二者结合 以达到既找到未知基因及蛋白质 巨立中,成军,钟彦伟.启动子DNA结合蛋白研究策略.世界华人消化杂志 又能够找到该蛋白质的精确的结合位点及证实二者结 2004;12(1):141-142 合的特异性. http://www .wj gnet .com/ 1009-3079/ 12/ 14 1.asp 2 研究方法 [4, 5] 0 引言 2.1酵母单杂交技术 酵母单杂技术是1993年由Li et al 新基因新蛋白质的发现和鉴定 以及他们之间相互作 从酵母双杂交技术发展而来的 其基本原理为:真核生 用的研究 赋予分子生物学以永不衰竭的生命力.启动 物基因的转录起始需转录因子参与 转录因子通常由 子DNA结合蛋白的研究是从转录水平上研究基因表达的 一个DNA特异性结合功能域和一个或多个其他调控蛋 调节 以寻找新的蛋白质为手段 以了解其对转录调节 白相互作用的激活功能域组成 即DNA结合结构域 作用为目的.为阐明某些疾病的发病机制及基因治疗打下 (DNA-binding domainBD)和转录激活结构域 [1] domainAD).用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是 基础 .现就启动子DNA结合蛋白研究策略综述如下. 一种典型的转录因子 GAL4的DNA结合结构域靠近羧 1启动子的结构及启动子DNA结合蛋白研究策略 基端 含有几个锌指结构 可激活酵母半乳糖苷酶的上 启动子是一段位于结构基因5 -端上游区的DNA序 游激活位点(UAS)而转录激活结构域可与RNA聚合酶 列 能活化RNA聚合酶 使之与模板DNA准确地结合 或转录因子TFIID相互作用 提高RNA聚合酶的活性. 并具有转录起始的特异性.基因的特异性转录取决于酶 在这一过程中 DNA结合结构域和转录