实验1.壳聚糖的制备和表征.pdfVIP

实验 1 壳聚糖的制备与表征 一、 实验目的 1.掌握由虾壳、虾皮（及蟹壳）等制取壳聚糖的原理和实验方法； 2.学习壳聚糖的表征方法，学习实验中所用仪器的使用方法，了解壳聚糖的用途。 二、实验步骤 1.壳聚糖的制备 （1）实验原理 壳聚糖提取/制备过程示意图 1 甲壳素(Chintin)是无毒、生物可降解的天然多糖，由 2- 乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖 组成，广泛分布于海洋及陆地上的低等节肢动物、昆虫外壳和少数真菌中，又称甲壳质、 几丁质。甲壳素外观为白色半透明固体, 不溶于水、稀酸、稀碱及普通有机溶剂，溶于 浓盐酸、硫酸, 但同时降解。甲壳素自然资源十分丰富，天然来源数量仅次于纤维素。 壳聚糖(Chitosan)是甲壳素水解其酰胺 N-脱乙酰基以后所得到的产物。一般而言，酰 胺 N-乙酰基脱去 55% 以上的甲壳素就可称之为壳聚糖，因此，壳聚糖实际上由2- 乙酰氨 基-2-脱氧-β-D-葡萄糖和 2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖两类单糖组成。壳聚糖在酸性溶液中游 离的伯胺基显示出碱性，可与氢质子定量发生反应。壳聚糖无毒，具有良好的生物可降 解性和生物相容性而被用作药物载体；其良好成膜性被广泛用作功能食品、食品添加剂 和果蔬保鲜膜等，应用越来越广泛。（壳聚糖应用方面的研究请课后自行查阅文献了解。） （2 ）仪器设备及试剂（此处仅为壳聚糖制备用，不包括壳聚糖表征用的）。 真空干燥箱，电动搅拌器，控温加热器，三口烧瓶，索氏提取器；NaOH （C.P. ）， HCl （C.P. ），丙酮（C.P. ）； 虾壳，由购自市场冻虾去肉而得； 虾皮，购自自由市场。 （3 ）实验步骤 甲壳素制备 ① 原料采集及预处理。 冻虾解冻以后，剥下虾壳（包括虾头），并认真剔除虾壳上残留的虾肉，充分清洗后， 室温下晾干，80 ℃下真空干燥过夜。 虾皮（视具体情况决定是否需要处理），经充分清洗后晾干，80 ℃下真空干燥过夜。 ② 脱脂脱蛋白脱钙。 称取一定量的预处理后的虾壳/虾皮，置于 80 ℃下2% NaOH 水溶液中处理 1 小时后， 用蒸馏水洗至中性，以除去油脂和蛋白；再用 1 mol/L HCl 于 30 ℃下浸泡 30 分钟后，用 蒸馏水洗至中性，以脱去钙质及盐分。重复上述操作三次。 ③ 脱色及产物收集。 将脱脂脱钙脱蛋白后的虾壳/虾皮置于索氏提取器中，用丙酮作溶剂进行脱色，可得 到白色片状的甲壳素。收集所得产物，并在 80 ℃下真空干燥 3 小时后，称取质量，计算 所得甲壳素的产率，比较不同原料中甲壳素产率的差异。 壳聚糖制备 ① 甲壳素脱乙酰化。 2 在氮气保护下，将 5.0 g 甲壳素在 150 mL 47% NaOH 溶液中于 110 ℃进行脱乙酰化 反应 1 h，冷却后倾出溶液，用蒸馏水洗至弱碱性。重复上述操作两次，得壳聚糖粗产物。 ② 脱色及产物收集。将壳聚糖粗产物置于索氏提取器中，用丙酮作溶剂进行脱色，可 得到白色片状的壳聚糖。收集所得产物，并在 80 ℃下真空干燥 3 小时后，称取质量，计 算所得壳聚糖的产率，分析比较不同原料所得甲壳素中壳聚糖产率的差异。 脱乙酰化过程中水解条件非常重要，不同的温度、水解时间和碱浓度都会得到不同 脱乙酰度的壳聚糖产品。因此，水解温度、碱的浓度及水解时间是需要研究的主要对象。 具体水解条件的探索在实验前视情况来确定。 2 ．壳聚糖的表征 （1）红外光谱（FT-IR ） 甲壳素脱乙酰化后，其 FT-IR 光谱有明显的变化，这种变化不仅可以作为定性/结构 分析的依据，而且还可以对脱乙酰化度进行定量分析。 ① 结构分析。壳聚糖与甲壳素红外光谱的最大差异表现在分子中酰胺键的特征吸收上。 -1 甲壳素红外光谱中 1655 cm 处的酰胺键特征吸收（酰胺 I 带）很显著。在完全脱乙酰化