广东汉族人群类风湿性关节炎患者IL18启动子基因多态性地的研究.pdfVIP

ofClinical 257 Journal Laboratory 临床检验杂志2007年第25卷第4期Chinese Science，2007，V01．25，No．4 文章编号：1001-764X(2007)04-0257-03中图分类号：Q503 文献标识码：A ·论著· 广东汉族人群类风湿性关节炎患者IL一18启动子基因 多态性的研究木 黄宪章，任燕歌，庄俊华，周强，丁海明(广州中医药大学第二附属医院二沙岛分院检验科，广州510105) RA可能相关。 关键词：类风湿性关节炎；白细胞介素一18；基因多态性 类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞及滑膜组 织中浸润的单核／巨噬细胞、淋巴细胞等通过自分泌 的RA诊断标准，并排除有严重心脑血管、肝肾疾病 或旁分泌的方式产生大量的细胞因子和炎性介质， 和其他自身免疫性疾病者。随机选取广东地区汉族 参与RA的致病过程。自细胞介素18(IL一18)能够无血缘关系的体检健康者168名，女101名，男67 强烈诱导IFN一^y和其他炎症细胞因子如IL．1p和肿 瘤坏死因子仅及各种趋化因子的表达，作用于关节 室检查指标均正常。 软骨细胞及滑膜组织，调节细胞应答，参与关节退 1．2研究方法 化，与类风湿性关节炎的发病关系密切¨引。我们用 者早晨空腹抽取静脉血2 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR—SSP)技术探讨 IL一18基因多态性与RA疾病易感性之间的关系。 改良的碘化钾提取法快速提取模板DNA，置一20℃ 1材料与方法 保存备用。 1．1 1．2．2 研究对象RA患者来源于2005年10月至 引物设计与合成 根据基因库设计IL一18 2006年5月广东省中医院风湿专科门诊和住院患 者，共120例，男20例，女100例，平均年龄(48．481)，由北京赛百盛公司合成。 表1 PCR—SSP分析IL．18基因启动子多态性的引物及产物长度 永基金项目：广东省自然科学基金资助项目。 作者简介：黄宪章，1970年生，男，副主任技师，医学博士，主要从事分子诊断研究。 258 JournalofClinical 临床检验杂志2007年第25卷第4期ChineseLaboratory 1．2．3 PCR扩增反应总体积为50山，含5斗l基 mmol／L 因组DNA，5出10×PCRbuffer，4山0．2 dNTPs，特异性正向引物和通用反向引物各1恤l， 内对照正向引物0。3斗l，TaqDNA聚合酶0．5pl， 不足体积用灭菌重蒸馏水补足至总体积。以上试剂 为宝生物工程公司(大连)产品。IL．18-607位点的 PCIt反应循环参数为：94℃预变性2min；94℃变 性20 s，53oC退火40s，72oC延伸40S，40个循环； 000 72℃延伸5min。IL一18—137位点的PCIt反应循环注：M，DL2 参数为：94℃预变性2rain；94℃变性20S，54℃退 其中l、2：GC型，3、4：GG型，5、6：CC型。 rain。 火40S，72℃延伸40S，40个循环；72℃延伸5 图1 IL．18基因-607和．137位点琼脂糖凝胶电泳图 96 以上反应均在Biometra PCR基因扩增 Tg