抗人DR5单克隆抗体诱导肝癌细胞株SMMC7721凋亡实验的研究.pdfVIP

抗人DR，单克隆抗体诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡实验研究 牛辉夏凤国 王广义(吉林大学第一医院普外科，吉林长春130021) 【摘要] 48 SMMC-7721凋亡，以死亡受体为靶点的抗体制剂为肝癌治疗提供新途径。 【关键词]抗人DR。单克隆抗体，细胞凋亡 f中圈分类号)R392．5(文献标识码]A[文章编号]1005-9202(2007)044)318-03 necrosisfactorre- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor 合组，根据实验数据结果，选定抗人DR5抗体浓度为 lated apoptosis—inducingligand，TRAIL)能够诱导多种肿瘤细胞发 生凋亡，而且对正常细胞无影响…，因而近年来TRAIL倍受人们每个浓度设5个复孔，按不同时间进行实验研究，将培养板置 关注。TRAIL诱导某些细胞发生凋亡，主要是通过与这些细胞于细胞培养箱内培养，分别于12、24、48、72、96h进行MTr实 相关的死亡受体结合而实现的，其死亡受体中的死亡受体DR， 验，弃去相应孔中的培养液，每孔中加入5mg／ml的M刀蔚菠 是比较重要的，它在肝癌细胞上高表达。但深入研究发现某些 20山，继续培养4h，吸弃上清液，再加入二甲亚砜(DMSO) 形式的TRAIL能够诱导正常肝细胞发生凋亡而限制了其临床应100出，振荡摇匀10min，使结晶能充分溶解，应用标仪在 570 用，为克服TRAIL临床治疗缺点，寻找高效低毒的死亡受体激活 nm波长下测定吸光度(A)值，计算细胞生长抑制率(IR)。 剂成为研究目标。近年研究表明抗人DR，的单克隆抗体与细胞 细胞抑制率=(1一实验组A值／对照组A值)×100％ 表面的死亡受体D凡结合也可诱导细胞发生凋亡犯j，本研究进 1．2．3 Annexin 行了抗人DR5单克隆抗体诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的 体诱导SMMC-7721的凋亡作用在12、24、72、96h分别收集 实验，为寻找新的肝癌治疗方法提供实验基础。 2斗g／ml抗人DR，单克隆抗体作用的培养细胞，调整细胞浓度 000 为5×10’爪／IIll取1ml细胞，1 r／min，4。C离心10min弃上 1材料与方法 1 000r／min4。C 清，加入冷的PBSml，轻轻振荡使细胞悬浮，1 1．1 材料肝癌细胞系SMMC-7721由本院免疫研究室提供， 离心10rain，充上清，重复加入1ml冷的PBS，轻轻振荡使细胞 000r／min 抗人DR5单克隆抗体由厦门大学免疫研究室惠赠，噻唑蓝 4。C离心10 悬浮，1 min，充上清液，于对贴壁细胞先 (mr)(美国Sigma公司)，碘化丙啶(PI)(美国Sigma公司)，用0．25％胰蛋白酶消化，制成单个细胞悬液，再用PBS离心洗 Annexin V—FITC／PI凋亡检测试剂盒(北京宝赛公司)。 V． 1．2 方法 FITC和5山的PI，轻轻混匀，避光室温反应15min，加入300“ 1．2．1 肝癌细胞株SMMC-7721培养方法取适量冻存细胞 结合缓冲液，立即上机(流式细胞仪)检测。 复苏，放于细胞培养瓶中，加入含10％胎牛血清的DMEM培养1．3统计学处理采用矿检验。 基(含青霉素100U／ml，链霉素10