新生仔猪下痢病原菌的分离鉴定及药敏试验.pdfVIP

2012第5期 养猪 SWINEPRODUCTION 127 新生仔 猪 下痢病 原茵 的分离鉴定及药敏试验 蒋成砚 ，谢 昆，田 婷 ，全舒舟 (红河学院生命科学与技术学院，云南 红河哈尼族彝族 自治州 661100) 中图分类号：$858．282．61+2 文献标志码 ：B 文章编号：1002—1957(2012)O5—0127—02 新生仔猪极易感染大肠杆菌病，造成断奶仔猪 1．4 动物 回归试验 成活率降低，给猪场造成严重的经济损失。致病性 将分离菌纯培养后经血清学检测的大肠杆菌接 大肠杆菌血清型众多，且容易出现耐药菌株，给该病 种于血清肉汤培养基中，37℃培养24h，每种血清 的防治带来很大的困难。因此，筛选有效防治该病 型的大肠杆菌分别腹腔接种5只平均体重约为20g 的药物就显得尤为重要。本试验对 1～l0日龄发病 的昆明种小白鼠，每只0．3mL。5只对照小白鼠以同 仔猪的粪便进行细菌分离鉴定和药物敏感性试验， 样方法注射生理盐水。接种后每6h观察 1次试验 旨在寻找有效防治仔猪黄 白痢的药物，为治疗本病 小白鼠的临床表现，连续观察 72h，对病死小白鼠 提供用药参考 。 进行病理剖检观察，并取病料进行染色镜检。判定标 1 材料与方法 准 ：在正常饲养条件下，能使小鼠在 24h之 内死亡 1．1 病料来源 者判为致病菌株。 试验于2011年 10月 15目至 2012年 3月5日 1．5 药敏试验 在红河学院生命科学与技术学院进行。本试验病料采 选择9种临床常用药物用药敏纸片法进行病原 白红河州规模化猪场 1～10日龄的发病仔猪，以无菌 菌药敏试验 。 棉拭子直肠采集粪样，置于灭菌青霉素瓶中作好标 2 结果与分析 记，以内装冰袋的泡沫箱快递送至实验室分离培养。 2．1 细菌的分离与鉴定 1．2 试验动物与试验试剂 对 1O份样品进行了鉴别培养基分离和革兰氏染 试验小白鼠购 自昆明医学院试验动物中心，体 色镜检。共得到符合大肠杆菌培养特性及形态特征菌 重在 1520go营养肉汤培养基、麦康凯琼脂平板、 株7株。对分离的病原菌进行鉴别培养基分离，在麦 MH培养基、普通琼脂培养基、伊红美蓝琼脂平板参 康凯琼脂上可看见表面光滑湿润、稍隆起、边缘整齐、 照微生物试验手册制作。细菌生化微量发酵管购 自 粉红色的圆形菌落；在伊红美蓝琼脂平板上呈紫黑 上海市医学化验所试验厂。药敏试纸片由上海伊华 色、具有金属光泽的菌落；在营养琼脂上形成圆形凸 医学科技有限公司生产。其它试剂均为分析纯。 起、光滑、湿润、半透 明、灰 白色菌落，直径 2～3mm。 1．3 方法 分离的大肠杆菌经革兰氏染色，镜检可见有粗短、两 1．3．1 细菌分离鉴定 将棉拭子上的粪便用 1mL 端钝圆的小杆菌，革兰氏阴性。甲基红、吲哚试验为 灭菌生理盐水洗脱于灭菌试管中，用接种环取上悬 阳性，柠檬酸盐试验、VP试验、明胶液化试验为阴 液划线接种于麦康凯琼脂平板，置 37℃培养24h， 性。该菌能发酵阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖、乳糖、棉 观察菌落情况。挑取典型的疑似菌落接种于伊红美 籽糖、麦芽糖、甘露糖、甘露醇、山梨糖、木糖、蔗糖， 蓝琼脂平板上，37℃培养 24h。挑取经以上鉴别为 不能发酵纤维二糖。 疑似大肠杆菌的单菌落革兰氏染色后镜检 ，对符合 参考 常《见细菌鉴定手删》中的索引从菌落形态及 大肠杆菌形态特征的菌落移植于普通琼脂斜面 ，置 菌体形态和生化鉴定结果，确定有7株符合大肠杆菌 4℃冰箱保存 。取纯培养菌落接种肉汤培养基，于 生化鉴定指标，判定为大肠杆菌。 37℃培养 24h后进行生化试验，根据 常《见细菌系 2．2 血清型检测 统鉴定手册》来确定所属菌种。 经血清型鉴定，病料分离菌株血清型分别为 0