枯草芽孢杆菌基因启动子的分离和鉴定.pdfVIP

卷 期 !! ! 微 生 物 学 报 %’ (!! . (! 年 月 ##! $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 枯草芽孢杆菌基因启动子的分离与鉴定 潘 皎 张义正 （四川大学生命科学学院 四川省分子生物学及生物技术重点实验室 成都 /1##/! ） 摘 要：利用启动子探针型载体 直接在大肠杆菌（ ）中分离枯草芽孢杆菌（ ） @BCD%! !#$%’#$’( #)*’ +(#’**, ,-.’*’ 的基因启动子片段，获得 个具有卡那霉素抗性的重组子。对 个抗性最高的重组子 ， ， EF/## 55 0 @BC G F, @BC G F,! @BC G F,$ 进行序列测定和同源性分析发现，所克隆到的基因启动子片段均来自于枯草芽孢杆菌的基因组，并且具 有枯草杆菌基因启动子的保守序列。对抗性最高的F, 片段进一步研究表明，它可以在大肠杆菌中高效地启动来 自于短小芽孢杆菌的碱性蛋白酶基因的表达，也能在枯草芽孢杆菌中启动卡那霉素抗性基因的表达。 关键词：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，基因启动子克隆，启动子探针型载体，序列分析 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） H6$ ) ###14/#? ##! #!4#!564#! ［］ 枯草芽孢杆菌（ ） 是一株 ! （ ）均由本实验室构建。 +(#’**, ,-.’*’ EF/## / @BCV%! / A#UR ［］ 1 种蛋白酶基因都发生了突变的菌株 ，分别为中性 ! !# 分子克隆工具酶及生化试剂：限制性内切 蛋白酶 、枯草溶菌素、胞外蛋白酶、金属蛋白酶、杆 酶， ，蛋白酶 ，牛小肠碱性磷酸酶（ ）， ) O.9,3) W PXD 2! 菌肽酶 和中性蛋白酶 。该菌株胞外蛋白酶活力 K.) 连接酶， 聚合酶 大片段（ I F ! ( #)*’ K.) $ W’3;Y 仅为野生菌的 ，因此将它作为基因工程宿主 片段）， 聚合酶等购自德国 公司和美国 # A0 J 4(5 K.) FN 菌来表达外源蛋白具有以下的优点：（1）外源蛋白可 V:R4FOZ 公司。其它试剂为国产分析纯试剂。 直接被分泌到细胞外的培养基中，这不仅大大降低 !# $% 操作技术 了某些外源基因的表达产物对宿主细胞可能存