β_2受体下调细胞模型的构建研究.pdfVIP

南 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) · 10 · JournalofNantongUniversity(MedicalSciences)2011：3l(1 p2受体下调细胞模型的构建研究 刘 华 ，徐 翼 ，盛泽波 ，章艳菊 ，张引子 ，倪松石 ” (’南通大学附属医院呼吸科，南通 226001；江苏省常熟市第一人 民医院呼吸科) [摘 要】 目的：通过沙丁胺醇刺激的方法构建细胞水平 13肾上腺索能受体(312AR)下调的模型，为研究 312AR下调 的分子生物学机制奠定基础 。方法 ：取正常 Balb／c小鼠气道平滑肌细胞(ASMC)进行原代培养(组织贴块法)，第 2～5代细 胞经形态学及间接免疫荧光法进行鉴定，将第 3-4代纯度在 95％以上的ASMC随机分为 2组：正常ASMC对照组和沙 丁胺醇刺激组。采用 RT—PCR和WesternBlot分别检测对照组和沙丁胺醇刺激组 312ARmRNA及蛋 白水平 的表达 。结 果：(1)原代培养的ASMC呈典型的 “峰谷”状生长 ，细胞浆 内有与细胞纵轴平行的特异性平滑肌 一肌动蛋白丝的阳性表 达，证实了平滑肌细胞的来源，并符合平滑肌细胞的形态学和生物学特性；(2)沙丁胺醇刺激组B2ARmRNA 的表达较对 照组降低(P(o．05)，132AR蛋 白表达亦明显降低(P0．05)。结论：成功构建q-+ 鼠气道平滑肌 312AR下调的细胞模型，为进 一 步研究哮喘患者B2AR减敏的机制奠定了良好的基础 。 [关键词1 气道平滑肌细胞 ；p：肾上腺索能受体 ；沙丁胺醇；细胞培养 【中图分类号】 R562．25 【文献标志码】A [文章编号】 1674-7887(2011)01-0010-05 Studyonconstructionofl~2-adrenoceptordownregulationcellmodel’ UU日眦 ，XUYi，SHENGZebo，ZHANGYa~ju，ZHANGYinzi，NISongshi (DepartmentofRespiratoryMedicine， Affiliated HospitalofNantongUniversity，Nantong226001；DepartmentofRespiratory Medicine，Changshu No．1People’S Hospita1) [Abstract] Objective：Toestablishcellmodelof132-adrenergicreceptor(3[~AR)downregulationofmurineairwaysmooth muscleinducedbysalbutamo1．So，andonthebasisofthisplaftorm tOelucidatethemolecularandbiologicalmechanism of 132ARdownregulationindetail．Methods：Airwaysmoothmusclecell(ASMC)fromBalb／cmicewasprimarilycultured．Twoto five generationsofceilswereidentifiedbycellmorphologyand indirectimmunofluoreseence．They weredivided intotwo groupsatrandom：controlrgoup and salbutamol-treated rgoup，whose purity wasmore than 95％ from third tO fourth generations．Thelevelof132ARmRNAandproteinexpressionofcontrolgroupandsalbutamol-treatedgroupweIedetectedby RT-PCR andWesternBlot．Results：Primarilycultured ceilsdem