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China B iotechnology, 2009, 29( 4): 83~ 87
*
**
万 成 许 杨 李燕萍 季宏飞
( 330047)
红曲菌是一种具有较高食用和药用价值的丝状真菌, 能够产生红曲色素莫纳可林 K 等 种
生理活性物质通过分析比较培养基蛋白质裂解液组成以及水化上样条件对双向电泳结果的影
响, 建立了红色红曲菌蛋白质组的双向凝胶电泳体系, 为从蛋白质水平研究红曲菌及其次级代谢产
物的生物合成提供依据结果表明:用 YES培养基培养红色红曲菌 6 , TCA-丙酮法提取菌体总蛋
白质, 蛋白质裂解液组分为 8mol/L尿素, 2mol/L 硫脲, 4% CHAPS, 1% DTT 和 2% Bio-lyte, 可获
得蛋白质样点数量 , 清晰度高的双向电泳图像, 为进一步研究红曲菌蛋白质组奠定了基础
红色红曲菌 双向凝胶电泳 蛋白质组学
Q819
, V) SDS, 20 % ( V /V ) , 25 % ( V /V ) 1. 5m ol/L
M onacolin K- T ris-HC l( pH 8. 8)
[ 1]
1. 1. 5 常用试剂 T ris
( ( TCA)
), -( DTT)
[ 2] TEMED
TCA-
[ 3] , B io-lyte
,
PDQuest, ( pH 3~ 10)7cm IPG ( pH 3~ 10
, , NL) Bio-Ra , G-250
, BBI, CHAPS Sigma
1. 1. 6 主 仪器 Sigma M ilipore
1
Bio-Ra PROTEAN IEF B io-
1. 1 Ra M in-iPROTEAN 3B io-Ra GS-800
1. 1. 1 菌种 M r 11, Pharmacia ULTRASPEC 4300
1. 1. 2 培养基 YES( 4% , 16
% ), MPPY ( 4% , 0. 2% 1. 2
, 0. 3% NaNO , 0. 05% KC l) 1. 2. 1 红曲菌丝体的培养 - 20
3
1. 1. 3 蛋白质裂解液 A: 8mol/L , 4% CHAPS, 11, 50
1% DTT, 2% B io-lyte; B: 8mol/L , 2m ol/L, 4 30s,
% CHAPS, 1% DTT, 2% Bio-lyte 50m l,
6
1. 1. 4 平衡缓冲液母液 36% (W /V) , 2% (W / 5 10 /m l,
180r/m in, 30 6
: 2008-11-26 : 2009-01-15
* ( IRT0540) 1. 2. 2 红曲菌总蛋白质的提取 TCA-丙酮法
** , : xuyang1951@ yahoo. com. cn ,
84 China Bi
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