巢式序列特异性引物PCR方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合的临床应用研究.pdfVIP

巾强强药，毛物技本2008年lO月第3卷第5期ChinMedBiotechnol，October2008。V01．3。No．5 ·论著· C 巢式序列特异性引物PR方法检测 HLA单倍体相合供受者问母胎微嵌合的 临床应用研究 于津浦，曹水，李慧，安秀梅，任秀宝 【摘要】 謦鹣探索装臻疲觜鬃戏穿残特筘摊雩|物聚合酶链式反藏 子治疗复发、难治性鑫盔瘸。近年有研究表明其对 (PCR，SSP)方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌 于肾癌、乳腺癌和卵巢癌等实体肿瘤也同样具有较 会状态的可行性。 好的疗效¨删。鉴于传统的鲇lo—HSCT采耀全捆合 方法选取25对掀行HLA单倍体禚食造血干绷胞移檬移植，供者来源困难，因此有越来越多的HLA单 治疗懿实髂黪癣患者发葵供者，貘受者魏褥子关系15铡， 父予荚系10例。采集供受者外周血提取瑟因组DNA，采相继开展起来，但也随之出现了如何选择合适的供 者等问题。坶胎微嵌合是指胎儿的造血干细胞在妊 用鬃式PCR．SSP方法检测患者外周觑中供者来源的 娠和分娩过程中进入母体并长簸存活的状态即】。来 HLA．DRBl位赢，并计算母骀微嵌合粥缝率。隧静t选取经 自HLA攀倍体相合的阉胞闯肾移植翻造盔干细 巢式PCR-SSP证实载会雕性和溺性基供受者往剃不同熬 胞移植豹豳顾性分析表明，母胎微液合有利于携带 患者释4例，采爝荧光原位杂交(F|sH)技术述行重复检 测，并与巢式PCR．SSP方法的榆测阳性率进行比较，同时父系HLA信息的子代细胞不被母体排斥，促进形 采髑噻睦蓬洼硷测这8穰患者分裂与冀寒缘袋者秘HLA成母骆移植耐受，弊防止严重的移植物挽宿主瘀 完全不相合无关第3入之间的混合淋巴细胞增殪反成 (MLR)，著诗舞臻麓攒数(s1)。 疗蓊迅速确定供受誊阍是秀存在母骆徽嵌合状态 对提商临床疗效具有非常重要的意义。为此，我们 结果巢式PCR．SSP方法灵敏度日，高达0．001％，并具有 拟探索建立一种新的町在短时间内确定HLA单 较好的特冥性。爨式PCR-SSP检测疆恭，在母f移攘关系 倍体相合供受者闻母胎微嵌合状态的实验方法，希 患者中母胎微嵌含阳件梭出率为40％(6／15)，而在父子移 望为糗廉诊断治疗簸够有濒帮助。 壤关系悫者孛鸯黢微焱会疆性捻爨搴兔0。巢式PCR。SSP 方法的检测灵敏度与FISH技术栩比明龆增高，冀检测阳 1材料和方法 性率分别为50％(448)和12．5％(1／8)。MLR检测显示， {．{材料 我合鞠性患者对其紊缘供者帮无关第3入矫瘸盘肇个孩缫 1．1。1 瘸铡来源 胞PBMC)的S1分剐失(O。949±0．023)、(1．320±0．095)， 嵌含鞠性意者对其亲缘供者帮无关第3入PBMC的S1 瘤患者共25例，其中男性13例，女性12例， 分别为(1．133±0．036)、(1．245±0．069)；嵌合阳性患者对 箕索缘供者PBMC懿壤蓬反应强度与嵌食醍性惑澎提魄平均年龄(55。6±13．O)岁。所有患者临床诊断均 符合IV期恶性实体瘤，包括肾癌6例，肺癌 明显