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振法对脑缺血大鼠大脑早期结构可塑性影响的研究 窦思东，黄清豹，毛忠清，柯玫瑰，陈艳，洪梅婷 福建中医药大学针灸学院，福建福州，350108 摘要：目的：探讨振法对脑缺血大鼠早期结构可塑性指标——生长相关蛋白一43(GAP-43)影响的研究。方 法：本研究选择清洁级健康雄性SD大鼠50只，体重300±209，随机分为五组：空白组，假手术组，模型 组，模型+电针治疗组，模型+振法治疗组。其中空白组、假手术组和模型组不加任何干预措施，模型组与 治疗组采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制成局灶性脑缺血模型。治疗组在造模成功后的次日分别进行电针 2／15Hz，强度lmA，一端电极接在百会穴，一端接在左前肢，强度以大鼠头部和左前肢轻微抖动为度；振 法治疗组应用振动按摩治疗仪进行刺激，输出峰值电压4一-6V，刺激频率50Hz；治疗组均持续时间20分 行免疫组化法对生长相关蛋白一43(GAP一43)表达的观察，并做统计分析。结果：各组大鼠在不同时间段生 长相关蛋白一43(GAP一43)表达的比较：①在造模后第1天，空白组和假手术组与其他三组有显著差异(P 空白组和假手术组与电针组、振法组无明显差异(PO．05)；④在各个时段，电针组与振法组比较未见明 长相关蛋白一43(GAP一43)表达均有明显恢复，接近于正常范围，与模型组相比有明显的差异，说明振法能 加快对脑缺血大鼠的早期结构可塑性的影响。 关键词：振法；电针；大鼠“百会”穴；生长相关蛋白-43(GAP一43) 1前言 近20年来，大脑神经系统结构与功能的早期可塑性已成为神经生物学研究发展的重要领域…。首先， 脑的可塑性的含义是指脑神经元之间的突触、相关蛋白在通过内、外环境的刺激作用下是可以进行结构重 是决定神经元再生、生长和神经结构可塑的内在重要因素之一乜1。针灸推拿治疗脑缺血已取得公认的疗效， 但对其作用机理特别是促进大脑可塑性形成方面探讨得不够深入。为此，我们选择与大脑早期结构可塑性 associated 密切相关的神经生长相关蛋白一43(growth 观察振法对这些指标的影响，探索其可能的作用机制，为临床推拿治疗缺血性脑血管疾病及其后遗症提供 理论依据。 2材料与方法 2．1实验动物 清洁级健康雄性Sprague 验室。根据《医学统计学》中的随机分组表，分批次将大鼠进行随机分配。每组10只大鼠。 2．2实验步骤 560 采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制成局灶性脑缺血模型船+51，实验大鼠以10％的水合氯醛(O．4 ml／lOOg) 腹腔麻醉后，仰卧固定于手术台上，颈部正中碘酒消毒，酒精脱碘，在颈部正中切开皮肤及浅筋膜，钝性分 端，造成左侧大脑中动脉供血区永久性局灶性缺血；然后进行神经血管复位，创口局部撒少许青霉素(约 4—6万单位)，逐层缝合组织及皮肤。术后，动物放回鼠笼中常规饲养。假手术组只进行双侧颈总动脉分离 即缝合。 2．3造模成功的纳入标准 神经功能缺损评分采用Bederson方法m’进行肢体功能的神经缺损评分：0分，无任何神经功能缺失：1 分，左前肢屈曲(即提尾悬空实验阳性)：2分，侧推抵抗力下降(即侧向推力实验阳性)，伴前肢屈曲，无转圈 行为：3分，同2级行为，伴自发性旋转。评分1-3的动物列入造模成功组。 2．4治疗方法 治疗组均选取督脉百会…穴，振法组用振动按摩治疗仪(JH3450)(浙江省金华市锦辉实业有限公司) 进行刺激【81，用脑立体定位仪将振动仪固定于百会穴处，轻贴皮肤，强度以大鼠头部轻微抖动为度，输出 肢，强度以头部和左前肢轻微抖动为度。治疗时间均持续时间20分钟，每天1次，持续14天。其他两组 大鼠在同等条件下饲养，未予任何处理。各组分别在第1天取3只，第7天取3只和第14天取4只，在治 疗结束后进行免疫组化法对生长相关蛋白一43(GAP．43)表达的观察。 2．5免疫组化步骤 实验结束后，称量大鼠的体重，用10％水合氯醛0．4 ml／lOOg腹腔注射麻醉动物，固定于手术台，迅 速打开胸腔，将灌注针头迅速插入左心室并进入主动脉，用剪刀在右心耳切口，快速灌注生理盐水大约 250ml，使灌注液体由此