坎地沙坦治疗大鼠急性胰腺炎的实验的研究.docVIP

坎地沙坦治疗大鼠急性胰腺炎的实验研究 坎地沙坦治疗大鼠急性胰腺炎的实验研究 作者：李创，郑起，阎钧 作者单位：上海交通大学附属第六人民医院 普外科，上海 200233） 【摘要】 目的 探讨选择性血管紧张素Ⅱ受体亚型AT1拮抗剂坎地沙坦对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis， AP)的影响。方法 54只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、AP组、AP+坎地沙坦组(每组18只)，腹腔注射20％L-精氨酸溶液建立AP动物模型，坎地沙坦用大鼠灌胃针灌注。各组大鼠分别在造模后第12，24，48小时分批（6只/组/批）心脏取血处死。取胰腺组织观察胰腺病理变化并评分（按Rongione标准），胰腺/体质量比，检测大鼠血清脂肪酶、TNF-Α以及IL-10的变化。结果 AP组胰腺炎症评分，胰腺/体质量比，血清脂肪酶、TNF-Α、IL-10较对照组明显升高。AP+坎地沙坦组胰腺炎症评分，胰腺/体质量比，血清脂肪酶以及TNF-Α较AP组降低。本实验中，应用坎地沙坦对AP大鼠血清IL-10无显著影响。结论 早期应用AT1受体拮抗剂坎地沙坦可以明显减轻大鼠胰腺的急性炎症病变及损伤。 【关键词】 急性胰腺炎；AT1受体拮抗剂；炎症因子；坎地沙坦；大鼠 急性胰腺炎是胰腺最常见的疾病。虽然绝大多数为轻型及自限性，但有1/5可发展为致命的重症胰腺炎[1]。急性胰腺炎的总病死率为5%～10%[2]，如出现并发症则增至35%或更高[3]。肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system，RAS)是体内一个经典的调节血压和水电解质平衡的系统。近年来研究发现，在胰腺组织中有局部RAS存在。胰腺的RAS有许多非经典RAS成分，影响胰腺的内外分泌功能。急性胰腺炎时，局部RAS被激活，这对胰腺的病理生理改变产生重要影响[4]。据此，本实验将血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦应用于急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP) 动物模型中，观察其对急性胰腺炎病理过程的影响。 1 材料和方法 1．1 材料 L-精氨酸（上海史瑞可生物科技有限公司）溶于生理盐水中配成20％ L-精氨酸；坎地沙坦（日本武田药品工业株式会社）溶于生理盐水分别配成0.2 g/L溶液；血清脂肪酶试剂盒（南京建成生物工程研究所）；大鼠TNF-Α、IL-10 ELISA试剂盒（上海复旦中科生物医学科研服务平台）。 1．2 方法 选用健康雄性SD大鼠54只(复旦大学医学院实验动物中心提供)，清洁级，质量250～280 g，清洁级饲养1周后用于实验。实验前禁食不禁水12 h，称质量，随机分为3组，每组18只。①AP 组：腹腔注射20% L-精氨酸2.5 g/kg诱导AP，共2次，间隔1 h；②AP+坎地沙坦组：诱导胰腺炎方式同AP组，造模成功后即予0.2 g/L坎地沙坦溶液灌胃[(2 mg/（kg·d）]；③正常对照组：予腹腔注射同等剂量生理盐水。各组实验大鼠在造模后恢复正常进食，并于第12，24，48小时分3批（6只/组/批）心脏采血处死，血浆离心后-80℃保存待测。小心分离整个胰腺，去除胰腺周围脂肪，称质量，用10%福尔马林固定。 1.2.1 胰腺/体质量比值测定及胰腺病理学检查 计算胰腺/体质量比值，代表胰腺水肿程度。取胰腺体尾部组织，10%福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色。由资深病理科医师盲法对胰腺病理切片观察并按照Rongione等[5]的标准进行组织病理评分，从组织水肿、炎性浸润、细胞坏死、出血4个方面的轻重程度评分。 1．2．2 血清学检测 血清脂肪酶采用酶比色法检测；血清TNF-Α、IL-10采用ELISA法检测，严格按照试剂盒说明书进行操作。 1．2．3 统计学方法 处理结果计量资料用x±s，SPSS13.0软件进行团体t检验以及秩和检验。P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2．1 　胰腺/体质量比值和胰腺病理学评分 总体来看，AP组胰腺/体质量比值和胰腺病理学评分均较对照组明显升高(P0.01)，AP+坎地沙坦组的胰腺/体质量比值和胰腺病理学评分较AP 组明显下降(P0.05)，但仍高于对照组(P0.01)。从时间段来看，AP组大鼠胰腺炎症评分从12 h至48 h逐渐增高，而应用坎地沙坦可改变这种趋势。见表1。 2.2 血清脂肪酶、TNF-Α及IL-10的变化 AP组血浆血清脂肪酶、TNF-Α、IL-10水平较对照组明显升高(P0.01)，AP+坎地沙坦组血清脂肪酶、TNF-Α水平较AP组明显降低(P0