一株产蛋白酶嗜碱菌株的分离_鉴定及酶学特性.pdfVIP

R e se a rch P ap e r 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica S in ica 50 1 : 54 - 59; 4 J anuary 2010 ISSN 000 1 - 6209; CN 11 - 1995 /Q h ttp : / / jou rnals. im. ac. cn / actam icrocn 一株产蛋白酶嗜碱菌株的分离 、鉴定及酶学特性 1, 2 1 1 郝建国 ,薛燕芬 ,马延和 1 中国科学院微生物研究所 ,北京 100 101 2 中国科学院研究生院 ,北京 100049 摘要 : 【目的 】筛选产蛋白酶嗜碱菌并对其进行鉴定和特性分析 。【方法 】利用碱性脱脂牛奶培养基分离纯化 产蛋白酶嗜碱菌 ,通过形态特征 、生理生化 、16 S rRNA 基因序列分析以及 DNA DNA 杂交实验确定菌株的分 类地位 ,利用酪蛋白水解法分析所产蛋白酶的 pH 和温度作用范围、稳定性和耐氧化剂能力 。【结果 】从我国 西藏盐碱湖样品中分离到一株产碱性蛋白酶的菌株 ZL223 ,该菌株为革兰氏阳性菌 ,最适生长温度为 37 ℃, 最适生长 pH 90 , 16 S rRNA 基因序列分析显示 ,菌株 ZL223 与假强芽孢杆菌 B acillus pseudof irm us OF4 亲缘 关系最近 , 16 S rRNA 基因序列相似性为 986% , DNA DNA 杂交结果显示与 B. pseudof irm us OF4 同源性为 86% 。菌株 ZL223产生的蛋白酶作用的最适 pH 为 12 0 ,最适温度为 40 ℃。【结论 】结合生理生化指标测定 的结果 ,鉴定菌株为假强芽孢杆菌 ZL223 B. p seudof irm us ZL223 。该菌株产生的碱性蛋白酶具有较高的 pH 适应性 ,值得进一步研究 。 关键词 : 嗜碱微生物 ;假强芽孢杆菌 ; 16 S rRNA 基因; DNA DNA 杂交 中图分类号 : Q936　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 000 16209 20 10 0 10054 06 嗜碱微生物 alkalip h ile s 是指那些最适生长在 细菌 ,对其进行了多项分类学分析和蛋白酶的酶学 pH 80 以上 ,通常在 pH 90 - 100 之间的一类嗜 性质分析 ,显示该菌株所产蛋白酶不同于已报道的 极微生物 [ 1 ] 。嗜碱微生物具有重要的工业应用价 碱性蛋白酶 ,为蛋白酶的工业应用提供了新资源 。 值 ,它们产生 的胞外酶多为碱性酶 , 在洗涤剂 、制 革 、纺织 、医药 、化妆品等的生产中有广泛的应用价 1　材料和方法 值 [ 2 ] 。研究嗜碱微生物及利用碱性酶资源是一个 11　材料 重要的研究课题 。嗜碱微生物广泛地存在于天然 111　样品来源 :样品采 自于我国西藏班戈盐碱 碱湖 、碱性沙漠等极端 自然环镜 , 以及水泥制造 、印 湖 ,主要由湖水和湖底沉积物组成 ,运抵实验室后 染以及造纸等人类生活和生产活动引起的人工碱 于 4 ℃密闭保存 。 性环境 [ 3 ] 。我国西藏拥有丰富的盐碱湖资源 , 由于 112　培养基 : 富集培养基 FJ :脱脂奶粉 Sk im 其特殊的地理环境 ,其中丰富的嗜碱微生物资源还 m ilk 10 g/L ,酵母粉 5 g/L , K H PO 1 g/L , M gC l 2 4 2 没有得到充分的开发利用 。本研究从我国西藏班 02 g/L ,N aC l 50 g/L ,N a CO 10 g/L ;分离培养培养 2 3 戈湖沉积样品中分离出一株产碱性蛋 白酶的嗜碱 基采用 Horiko sh i Ⅰ培养基 [ 1 ] , N aC l量改为 50 g /L 。 基金项 目: 国家 “863计划 ”2007AA02 1306, 2006AA020202 通信作者 。Tel: + 座机电话号码7590; Fax: + 座机电话号码76 16; Em ail: m ayanhe@ im. ac. cn 作者简介 :郝建国 1982 - ,男 ,天津人 ,硕士研究生 ,主要从事嗜碱微生物研究。Em ail: haojg@ im. ac. cn 收稿日期 : 座机电话号码;修回日期 : 座机电话号码 ? 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 55 郝建国等 : 一株产蛋白酶嗜碱菌株