一株纤维素酶产生菌的筛选鉴定.pdfVIP

第2l卷第5期 四川理工学院学报 自然科学版 V01．21No．5 JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY OF 2008年 10月 SCIENCE ENGINEERING NATURALSCIENCEEDITION 0ct．2oo8 文章编号 ：1673—1549 2008 05—0067—04 一 株纤维素酶产生茵的筛选鉴定 张 强 l1，杨 岩 1．四川理工学院生物工程系，四川 自贡 643000；2．酿酒生物技术及应用四川I省重点实验室，四川I 自贡 643000 摘 要：用CMC平板筛选方法，从草丛土样 中筛选到一株产纤维素酶的菌株 ，该菌在20℃一50℃、pH4．0～ l0．0、NaCl1．O％～10．O％的条件下均能生长，在26℃一39℃、pH6．0～8．0、NaC14．O％一6．O％条件下生长快速。经采 用Biolog进行碳源利用鉴定判定为黄曲霉，命名为AF-1。AF-1的CMCase为 19．26U／mL，FPA为6．22U／mL，纤维分 解率为2O．6％。采用单因素法对AF-1产酶条件进行了初步测定。 关键词：纤维素霉；黄曲霉；筛选；鉴定 中图分类号：TQ925+．9 文献标识码：A 纤维素是地球上最丰富的有机物质，是木材、纸张、 1．1．1土样 棉、麻和农副产品的主要成份，是人类最经济、最广泛的 苗圃、草丛间土样，另采用纸屑、木渣浅埋半年后采 自然资源。 集土样 均采 自自贡汇东地区 。 纤维素酶 cellulase 又称纤维素酶系，是一类复杂的 1．1．2 菌种 复合物，是所有参与降解纤维素并将其最终转化为葡萄 AF一1，本研究筛选得到，初步鉴定为黄曲霉；绿色 糖的各种酶的总称 l1。纤维素酶最初是在蜗牛的消化液 木霉，购 自上海伯奥生物科技有限公司。 中发现的，除了已知的许多微生物能分泌纤维素酶外， 1．1．3 主要培养基 一 些高等动植物也能分泌。微生物产纤维素酶研究较 纤维素选择培养基Al5J：蛋白胨 10g，酵母粉 10g，羧 多，已发现许多真菌和细菌都能分解利用纤维素，目前 甲基纤维素钠 fCMC—Na 10g，刚果红 0．2g／L，NaC15g， 用于研究生产纤维素酶的微生物大多属于真菌，其中研 KH2PO lg，琼脂粉 20g，蒸馏水 1000mL，121~C灭菌 究较多的是木霉属、曲霉属、青霉属、根霉属和漆斑霉 20min。 属。细菌、放线菌由于分泌的纤维素酶活性较低且胞外 纤维素选择培养基 B：KHP040．5g／L， NH4 2SO2g／ 分泌型较少相对研究不多。 L，MgSO ·7H200．25g／L，微晶纤维素粉 1．88g／L，刚果红 纤维素酶已广泛地应用于食品、饲料加工、纺织、洗 0．2g／L，琼脂 14gL／，明胶 2g／L，pH 自然，蒸馏水 lO00mL， 衣、农业等多个领域中闭，在生物能源方面，以植物纤维 121c 【灭菌 20min。 为原料生产燃料乙醇的研究将使我们能够节约大量的 种子培养基：复合蛋白胨 10g，葡萄糖 10g，酵母膏 淀粉资源，降低燃料乙醇的成本31『，同时提高我们对大量 10g，pH7．0，蒸馏水 lO00mL，121℃灭菌 20min。 的可再生能源的利用效率，降低我们对石油的依赖程 液态发酵培养基阿：稻草4g，麸皮 lg， NH4 ~PO 营养 度。据估计，纤维素水解成葡萄糖所需的酶蛋白要比淀 液 NH4 3PO42．06％，MgSO ·7H2O0．05％，KH2P040．01％ 粉相应水解所需的酶蛋白多 100倍 。这是影响纤维素 200％ V／W 12．5mL．调pH值至 6．0～7．0，蒸馏水 1000mL， 酶实际应用的重要原因之一。因此，筛选纤维素酶比活 121℃灭菌20min。 ’ 力高的菌株无疑有着重要的意义。本文报道了一株纤维 保藏培养基：CMC—Na5g／L，蛋白胨5g／L，KH2POlg／ 素酶产生菌的筛选、鉴定工作。 L，MgSO4·7H200．5g／L，酵母粉 0．5g／L，琼脂 15g／L，pH 自 1材料与方法 然，蒸馏水 1000mL，121oC灭菌20min。 1．1材料 1．1．4主要试剂与药品 收稿 13期：2008—05—16 作者简介：张 强 1975- ，男，四川乐山人，讲师，主要从事应用微生物及发酵工程方面的研究工作。 68 四川理工学院学报 自然科学版 2008年 l0月 羧 甲基纤维素钠，ARf成都科龙 ；微晶纤维素，BR 取 lmL稀释 1O倍的酶液，加入 lmg滤纸条、lmL 上海恒信 ；刚果红 成都科龙 ；麦芽汁琼脂，BR 北京奥 pH5．0的柠檬酸缓冲溶液于 55~C保温 60min，再加入 博星