三芪口服液对5%2f6肾切除大鼠肾脏组织中CD4%2b、CD8%2b与CD68%2b细胞表达影响.pdfVIP

+ + + 三芪口服液对5/6 肾切除大鼠肾脏组织中CD4 、CD8 及CD68 细胞表达的影响 1 1 2 3 4 5 6 6 7 8 韦芳宁 杨霓芝 陈子林 杨海峰 丁海明 韩凌 邓时贵 欧润妹 欧爱华 梁燕芬 2 2 2 胡子衡 杨小红 王健 【摘要】目的 通过动物实验，观察三芪口服液对5/6 肾切除大鼠慢性肾衰肾脏组织中 + + + CD4 、CD8 及CD68 细胞表达的影响，探讨三芪口服液延缓肾脏损害的作用机理。方法 按 照随机分配原则将SD大鼠分成6组，分别为空白对照组、模型对照组、包醛氧淀粉组和三芪 口服液高中低剂量治疗组。口服三芪口服液12周后分别观察各组大鼠一般情况、肾功能、 + + + 血小板计数以及光镜下肾脏病理的改变和CD4 、CD8 及CD68 细胞的表达结果。结果 三 芪口服液治疗后，与模型组比较治疗组能降低血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）及血小板 + + + （PLT）水平，上调CD4 细胞，下调CD8 及CD68 细胞，差异具有统计学意义 P 0. 05 。 结论 三芪口服液能明显调节淋巴细胞亚群及减少巨噬细胞对肾组织的浸润，减轻肾损伤， 改善肾小管间质纤维化，此可能是三芪口服液延缓慢性肾脏疾病（CKD）进程的机制之一。 【关键词】 三芪口服液；慢性肾脏疾病；5/6 肾切除大鼠；淋巴细胞亚群；巨噬细胞； 肾小管间质纤维化 【说明】终末期肾病（ESRD）是各种 CKD 不可逆的最终转归，其病理特征系肾小管 [1，2] 间质纤维化 ，与细胞免疫混乱导致的肾损伤密切相关。三芪口服液是广东省中医院研制 [3，4] 的中药复方口服液。动物实验研究 显示，三芪口服液可明显减轻慢性肾炎模型动物的肾 脏病理损害，从而起到延缓慢性肾脏疾病进展的作用。本实验观察了三芪口服液对 5/6 肾 切除慢性肾衰大鼠模型肾脏病理形态、肾功能的保护作用及对肾脏淋巴细胞亚群和巨噬细胞 的影响，探讨其延缓CKD 进展的机理。 材料与方法 1 材料 1.1 动物 雄性SD 大鼠（广东省医学实验中心提供），6-8 周龄，体重200~220g ，共 102 只。微生物级别：SPF 情节级动物。质量合格证号：0049460 。 1.2 药物 三芪口服液流浸膏，由广东省中医院制剂室提供，产品批号：090505 。包 醛氧淀粉，由天津太平洋制药有限公司提供，产品批号：090503 。 1.3 主要试剂与仪器 特异性一抗：CD4 小鼠单克隆抗体（购自Thermo 公司）；CD8 小鼠单克隆抗体（购自MILLIPORE 公司）；CD68 小鼠单克隆抗体（购自Santa 公司）；二 抗 No: PV-6000-G , 购自北京中杉金桥公司 ；日立7170A 全自动生化分析仪；120 全血 细胞分析仪。 2 造模与分组 ★本课题为广东省科技厅计划项目 课题编号：2006B座机电话号码 1 广东省中医院肾内科 2 广州中医药大学硕士研究生 3 广东省中医院病理科 4 广东省中医院二沙分院检验科 5 广东省中医药科学研究所 6 广东省中医院动物实验中心 7 广东省中医院流行病学教研室 8 广东省中医院制剂室 [5，6] 大鼠造模前给予大鼠充分禁食禁水6～8 h，造模方法参照文献 ，采用5/6 肾切除术 复制慢性肾衰竭模型。102只大鼠中随机抽取13只进入空白组，其余制作大鼠5/6 肾切除模 型。大鼠造模过程中，因术中出血过多、切除肾组织过多及护理不当而死亡24只，造模成 功65只。使用随机软件包PEMS 3.1产生随机数字，按随机数字大小排序，等分为5组，即 模型组 TBG 、包醛氧淀粉组（CAO ）、三芪口服液高剂量组（THD）、中剂量组（TMD ）、 及低剂量组（TLD）各13只。 3 给药 [7] 根据临床经验，三芪口服液在人的剂量为 11.6 g/60kg*d, 根据体表面积换算公式 ， 大鼠的剂量为1.34g/200g*d. 三芪口服液流浸膏（密度为1.1 ）配成混悬液用以灌胃。高 剂量组给4ml 混悬液灌胃。中剂量组给予2ml 混悬液配以0.9%氯化钠溶液2ml 灌胃。低 剂量组给以1ml 混悬液配以0.9%氯化钠溶液3ml 灌胃。包醛氧淀粉组给以1.7g 包醛氧淀 粉配以0.9%氯化钠溶液制成4ml 混悬液灌胃。而模型组与空白组各给以4ml 的0.9%氯化 钠溶液灌胃。6 组均给药至12 周末。 4 标本采集与制作 治疗前心脏采血检测尿素（BUN）、肌酐 （Scr）、血小板计数 （PLT）等指标。治疗12 周后，腹主动脉采血复测上述指标，残肾以 10 ％福尔马林固定，脱水、浸蜡、包埋、切片， 做常规病理HE、PAS 和 Masso