瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在高糖所致足细胞损伤中作用与机制.pdfVIP

的表达以及胞内脂质的积聚情况。 mmol／L、0．02mmol／L、O．04mmol／L、O．08mmol／L、0．16 方法：分别给予不同浓度软脂酸 0 mmol／L、0．32 mmol／L 软脂酸联合炎症因子 25 1NF．a或20IL．6 处理肾细胞。分为六个组：对照组， ng／ml ng／ml 软脂酸处理组，TNF—a处理组，IL．6处理组，软脂酸联合TNF．a组，软脂酸联合IL．6组。 胞FAT／CD36mRNA及蛋白表达的影响；油红。染色观察两种肾细胞形态及脂质的积聚情 况；定量比色法检测肾细胞细胞甘油三酯 TG 水平；ELISA检测两种肾细胞游离脂肪酸 FFA 含量。 结果：软脂酸呈浓度依赖性上调HMCs和HK-2细胞FAT／CD36mRNA和蛋白表达。与单 mRNA和蛋 纯软脂酸处理组相比，两种炎症因子进一步刺激脂肪酸负荷的肾细胞FAT／CD36 白表达增加。油红O染色显示，与对照组相比其余五组红染颗粒增多，其中以软脂酸联合 TNF．a组和软脂酸联合IL．6组最多。胞内TG和FFA含量测定显示，与对照组相比，其余 五组TG和FFA含量均增加，且以软脂酸联合TNF．a组和软脂酸联合IL．6组最为显著。 结论：炎症明显上调脂肪酸负荷的肾细胞FAT／CD36表达，加重胞内脂质积聚。 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在高糖 所致足细胞损伤中的作用及机制 王惠陈珊刘建社张春 华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科，武汉430022 目的探讨高糖刺激对体外培养足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 transient receptor cationchannel potential actin， F—actin 表达及分布的影响，探讨TRPC6在高糖所致足细胞损伤中的作用及可能机制。 方法 首先将体外培养的足细胞分为三组：高糖刺激组 HG，D．葡萄糖30mmol／1 ，高 D一葡萄糖5．6mmol／1 ，各组细胞应用D一葡萄糖或甘露醇刺激后采用反转录一聚合酶链锁反 应reverse chain transcription-polymerase 分布的改变，并进行统计学分析。然后用脂质体将针对TRPC6基因的小发夹结构RNA small RNA，shRNA PGCsi—TRPC6BshRNA 质粒转染体外培养的永生化小鼠足细胞系， hairpin 同时选择不与任何其它基因同源的序列NC作为阴性对照。再将足细胞分为四组：正常糖对 32 高糖刺激+转染PGCsi．TRPC6B mRNA的表达，Western 糖或甘露醇刺激后采用RT-PCR法检测TRPC6、desmin、nephrin 罗丹明标记的phalloidin检测F—actin在足细胞表达和分布的改变，并进行统计学分析。 结果 与control组相比，HG组TRPC6，desmin mRNA和蛋白表达量均明显增加，nephrin mRNA表达量，F．actin呈正常分布的细胞所 组相比，mannitol组TRPC6、nephrin、desmin 占的百分比无明显改变。将PGCsi．TRPC6B shRNA质粒转染体外培养的永生化小鼠足细胞 组与control组相比TRPC6 组，PGCsi-NC+HG组TRPC6mRNA、desmin mRNA mRNA和蛋白表达量明显增加，nephrin 和蛋白表达量明显下降，F—actin呈正常分布的细胞所占的百分比明显降低，凋亡细胞所占 mRNA、desmin mRNA和蛋白表达量明显增加，F．actin呈正常分布 mRNA和蛋白表达量明显下降，nephrin 的细胞所占的百分比明显增加，凋亡细胞所占的百分比明显降低。 结论 高糖可导致体外培养的足细胞TRPC6表达上调，而TRPC6高表达引起 细胞损伤的机制之一。 【关键词】 高糖；瞬时受体电位阳离子通道蛋白6：足细胞 线粒体功能障碍在醛固酮诱导肾小管上皮．间充质转分化中的 作用及其干预研究 袁杨刚宰黄松明术撑朱春华宰丁桂霞牛陈荣华撑张爱华木撑 术南京医科大学附属南京儿童医院‘肾脏科；弹南京医科大学儿科研究所南京210029 目的：探讨过氧化物酶体增殖子活化受体Y共激活因子。let PGC—let 及其上游调控分子沉 的影响及PGC—let发挥作用的线粒体机制的分析。 方法：体外培养人肾小管上皮细胞HK一2细胞。检测线粒体功能的指标包括：荧光探针 MitoSOX染料检测线粒体内活性氧生成情况；荧光素酶法检测细胞内ATP含量；JC．1染色 33