纳豆芽孢杆菌分离及纳豆激酶活性的的研究.pdfVIP

摘要 纳豆是日本的一种传统食品，具有很高的营养价值，其主要的活性成分——纳豆 激酶具有显著的溶解血栓的功能。纳豆激酶作为一种新型的溶栓药物，与目前临床上 常用的治疗血栓的药物链激酶、尿激酶比较，克服副作用大、体内半衰期比较短、价 格昂贵等局限性，具有安全性高、可口服、溶栓效率高、药效时间长等突出优点，具 有广阔的开发应用前景。本文主要是对筛选出的纳豆芽孢杆菌菌株展开生理学的相关 研究，探讨纳豆芽孢杆菌的蛋白酶特性、纳豆芽孢杆菌中纳豆激酶的分离及不同理化 因子对液体发酵产纳豆激酶的影响，为进一步的研究提供理论依据。 本文首先分离纳豆芽孢杆菌。因待分离菌株为纳豆枯草芽孢杆菌，而纳豆枯草芽 孢杆菌具有耐盐耐热的特性，故将经高温处理的纳豆菌菌悬液稀释涂布于高盐培养基 上进行目的菌株的初筛，选择具有芽孢杆菌特征的革兰氏阳性菌株，将初筛菌株点种 于脱脂牛奶培养基进行复筛。最终由纳豆茵粉中获得1株菌株，命名为BN；由自制 株进一步进行生理生化鉴定试验，鉴定出这6株纳豆菌均分属于枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)种。 对纳豆芽孢杆菌蛋白酶的特性进行了一系列的研究。筛选得到的6株菌株均具有 产蛋白酶的能力。在pH值、温度、金属离子等理化条件对BN-4菌株蛋白酶活性影 响的试验中发现：纳豆芽孢杆菌BN．4菌株蛋白酶活力在pH6．o~10．0范围内变化不大， pH低于5．O和高于10．0时酶活力显著下降；纳豆芽孢杆菌BN-4菌株蛋白酶作用的 最适温度为40℃，温度对蛋白酶活力的影响显著；5mmol／L终浓度的金属离子F一+、 为97％、83％、87％、99％，而终浓度为5mmo儿的C对蛋白酶活力有激活作用， 含K+Smmol／L的BN-4菌株粗酶液蛋白酶活力是空白粗酶液蛋白酶活力的125％。 硫酸铵饱和沉淀法分离纳豆芽孢杆菌BN-5菌株粗酶液中的纳豆激酶，可先向粗 清，沉淀即为初步分离得到的纳豆激酶。 用试管定量法分别测定了分离得到的6株纳豆芽孢杆菌菌株粗酶液中的纳豆激 46．9鹏·min～·血～、49．4甥·min．1·ml一。 为确定纳豆芽孢杆菌液体发酵产纳豆激酶的最佳条件，以普通发酵培养基为基 础，分别改变培养基的成分及含量，考察培养基组成对纳豆芽孢杆菌液体发酵产纳豆 激酶活力的影响：分别改变培养温度、培养时间等，考察培养条件对纳豆芽孢杆菌液 体发酵产纳豆激酶活力的影响。以3％的麦芽糖为碳源，1．5％的酵母膏为氮源， 7．5，接种量为2‰装 O．1％MgS04，0．04％CaCh，0．2％Na2I-IP04，0．1％N龇P04，pH 液体发酵产酶培养基产纳豆激酶活力比基础培养基的酶活力提高了1．5倍。 关键词：纳豆芽孢杆菌，蛋白酶，纳豆激酶，条件优化 Ⅱ Abstract main traditionalfoodin nutritional its active Nattoisa Japanwi也high value,and whichisanew of has isnattokinase type thrombolyticdrug．Nattokinase ingredient andurokinasewhich are significantthrombolyticfunction,compared、丽也streptokinase usedinthetreat nattokinaseCan thecurrent