应用FTIR分析过量表达HPSPHI转基因与野生型天竺葵叶片在甲醛胁迫下的生理特性差异.pdfVIP

笫32卷，第5期 光谱学与光谱分析 V01．32，No．5，ppll98—1202 1 and 2。0 2年5月 SpectroscopySpectralAnalysis May，2012 应用FTIR分析过量表达HPS／PHI转基因与野生型天竺葵叶片 在甲醛胁迫下的生理特性差异 唐丽娟1，张亚楠1，宋中邦1，张韦1，黄庶识2，李昆志1，陈丽梅H 1．昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程技术研究中心，云南昆明650500 2．广西科学院生物物理实验室，广西南宁530003 摘要6一磷酸已酮糖合成酶(HPS)和6一磷酸果糖异构酶(PHI)是细菌同化甲醛的关键酶。13C-NMR分析 结果说明在天笆葵叶绿体中过最表达HPS／PHI融合蛋白可把RuMP途径整合成卡尔文循环的一个支路， 在转幕闪天煞葵叶绿体中创造一个甲醛光合同化途径。运用FTIR技术分析过最表达HPS／PHI转基因与野 生型天竺葵在甲醛胁迫下体内各物质含量的变化规律及光谱表征。考察FTIR能否成为一种鉴定有甲醛光 合同化途径的转基因植物与野牛趔植物表型差异的新方法。分别用4mmol-L-1甲醛处理野生型和转基因 mmol·L-1 植物0，1，2，3，4d，通过对两种植物经甲醛处理不同时间后各光谱特征的比较分析发现，用4 甲醛处理4d后转基闪植物中的碳水化合物、蛋白质、脂肪族化合物等的含最明显高于野生型植物。这可能 是由于安装HPS／PHl甲醛光合同化途径后使转摹闪植物间化代谢甲醛的能力更强。能将更多的甲醛固定为 6—磷酸果糖．然后进入各种同化途径用于合成细胞内的各种组份所致，说明FTIR可作为一种鉴定有甲醛光 合同化途径的转摹闪天竺葵与野生型天竺葵表型差异的新方法。 关键词红外光谱；转基因天竺葵；甲醛同化；HPS／PHI融合蛋白；表现差异 中图分类号：0657．3文献标识码：A 1000—0593(2012)05一1198一05 DOI：10．3964／j．issm 甲醛(HCH())是一种非常活泼的化合物，几乎对所有的 引 言 生物来说都有毒性。植物通过光合作用的卡尔文循环途径只 能同定C02，它们吸收HCH()的能力非常有限。核酬糖单 随着植物转基因技术的发展与成熟，转基因植物在基础 磷酸途径(RUMP)是甲基营养菌固定HCHO的一种非常有 研究领域是验证植物基因功能常用的试验材料，同时还有很 效的代谢途径，是甲基营养菌中高度发展的甲醛脱毒机制。 多转基因植物被批准应用到农业生产上。目前对转基因植物 RuMP中固定HCHo的关键酶是6-磷酸己酮糖合成酶 的检测使用的方法如PCR、核酸杂交、蛋白杂交等大多数属 于分子生物学的方法，使用这些方法的前提是需要有所转移 糖(Ribulose5-P，Ru5P)在HPS作用下缩合产生6一磷酸己酮 的T-DNA或目的基因或筛选标记基阂的核酸序列或编码蛋糖(Hexulose 白质的氨基酸序列及特性方面的信息，但是在进行国际贸易 6一磷酸果糖(Fructose 或商品交易时，商家为f保护其经济效益，不会自觉向检测 续反应底物Ru5P及产物F6P均是植物卡尔文循环中间产 机构提供这些信息，因而检测机构很难或无法用上述方法鉴 物，我们的研究结果证明在转基因拟南芥和烟草叶绿体中过 别没有任何背景信息的植物是否为转基因植物。在转基因植 量表达来自甲基营养菌(MycobacteriumgastriⅧ19)的HPS 物中过境表达或抑制r某螳基因的表达水平后可能会引起植 和PHI．HPS可利用卡尔文循环的