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卷 期
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年 月
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利用 层蛋白在细胞表面展示 淀粉酶和金属硫蛋白
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吴怀光 刘 欣# 孙 明 喻子牛
（华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室 武汉 !1$$4$ ）
摘 要：选用苏云金芽胞杆菌 菌株细胞表面 层蛋白作为表面展示载体，利用其 端信号肽以及锚定序列分
595 J: 0:
别将不同生物特性的外源蛋白带到胞外并锚定在细胞的表面。为研究外源蛋白的分子量和生化特性对表面展示
以及对其在细胞表面生物活性的影响，选用分子量较大的分泌性蛋白 :淀粉酶和富含半胱氨酸的非分泌性蛋白金
!
属硫蛋白作为目标蛋白。将 :淀粉酶的结构基因（ ）和金属硫蛋白的结构基因（ ）与 层蛋白的锚定区
! !# $% J: $’(
结合，构建融合蛋白基因$’(K !# 及$’(K $% ，克隆至穿梭载体 LM91$! 上，得到重组质粒 L6N6J8:1$! 和L6N6JN:
1$! ；转入带有帮助质粒的重组菌株6N6%4%K L6N6:5J8 中，得到新的重组菌株6N6J85 和6N6JN5。JOJ:P8Q 显示
融合蛋白 和 在重组菌的表面得到了表达。利用锥虫蓝染色 打孔加膜法表明重组菌 的确
JRMK8NS JRMK JN98 K J85
具有表面酶活性，淀粉酶被固定在细胞表面。碘液法测定的数据表明重组菌 的菌悬液样品较之受体菌
: J85
!
6N6%4% 菌悬液样品酶活提高了!# T! U 。0@:098:琼脂糖微球吸附试验显示重组菌JN5 能够被微球所吸附，证实
在重组菌表面具有活性。对游离镉离子的吸附试验显示重组菌对镉离子的吸附能力是对照受体菌的 倍。
JN98 !
关键词：苏云金芽胞杆菌， 层蛋白，细胞表面展示，融合蛋白基因
J:
中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ）
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层蛋白是位于细胞外壳最外层的一类表面结 ， ）同源性高达 ，适合作为表面展示的
J: ?’,@Z
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