最新高通量测序技术(下一代测序技术)原理及应用.pdfVIP

最新下一代测序技术原理与应用 最近整理的资料，来自华大测序和北京市计算中心 Illumina HiSeq 2000 .HiSeq 2000 是Illumina 公司2010 年推出的一款新的测序仪，它的测序原理和Genome Analyzer 相同，采用稳定的可逆终止 法边合成边测序技术。该技术使用4 种含有末端阻断基团和不同荧光信号的碱基进行模板互补链的合成， 不仅确保了测序的 高精确性和高顺序性，而且排除了由重复序列和同聚物导致的测序错误。 .与Genome Analyzer 不同，HiSeq 2000 融合了最新的光学系统和制造工艺，该光学系统采用2 个激光源对Flowcell 进行扫 描，并使用4 台照相机对4 种碱基分别进行记录，大幅度减少了 不同碱基之间的信号干扰，提高了测序系统的准确度。同 时，HiSeq 2000 使用了新颖的双表面成像技术，增加了Flowcell 的有效面积，从而提高测序产量和降低成本。 .HiSeq 2000 测序涉及生物学各领域，包括DNA 测序、RNA 测序、宏基因组测序、甲基化测序、外显子捕获测序、ChIP-Seq 等。因此，HiSeq 2000 能够为基因调控分析、转录组分析、SNP 位点、结构变异分析和疾病分析等提供迅捷、庞大、准确的信 息数据，为您的科学研究提供可信的保障。  HiSeq 2000 性能参数：  整体分析 .HiSeq 2000 使用Windows Vista 操作系统，具有最简化和直观的单个操作员流程。流动槽上样，触摸屏式用户界面，以及实 时监控分析系统的设计使操作更简洁、准确。庞大的数据输出使多样品、大基因组、复杂基因组等测序项目触手可及。  测序性能参数   最新性能展示（2011 年 7 月进行Truseq v3 试剂升级） *Flowcell 的升级使测序通量及数据量得到突飞猛进 *Cluster generation 试剂升级降低了测序过程中出现的GC bias *测序试剂的升级提高了测序质量 *软件和算法的升级使质量值更准确，可靠  测序实验流程  AB SOLiD System  .SOLiDTM 4.0 系统是由AB 公司研发的新一代超高通量基因测序分析系统，可运用到多个领域。该系统采用结合在磁珠上单 分子DNA 片段簇为测序模板，以四色荧光标记寡核苷 酸进行连续的连接反应为基础，对扩增的DNA 片段进行大规模高通量测 序。SOLiDTM 4.0 系统采用双碱基编码的方法使得其准确度可以达到99.94% 以上。以最大通量的标签实验为应用的基础， SOLiDTM 4.0 系统可以为全转录组、染色质免疫共沉淀（ChIP ）和小RNA 的发现提供高度敏感的检测方法。  测序实验流程：  1、文库制备 .随机片段文库 .末端配对文库  2、模板磁珠制备 .油包水微型反应体系 .DNA 片段在磁珠上扩增  3、磁珠固定 .磁珠随机固定在测序玻片表面 .可增大每个测序玻片上的磁珠密度  4 、边连接边测序 .四色荧光标记寡核苷酸 .边连接边测序  5、测序引物重置 .每一个模板选用5 个引物进行连接反应测序  技术特点： .高通量，SOLiD™ 4.0 每个测序反应能够获得100G、2000M 标签的数据量； .高准确性，每个DNA 碱基检测2 次，增加了序列读取的准确性； .高稳定性，测序时采用连接反应，有效地解决了多聚核苷酸序列难读取的问题； .高灵活性，开放式测序芯片结构，可将一张芯片分为1 分区、4 分区和8 分区，分别安排样品测序，配合分子测序标签技术 （SOLiDTM Barcoding ）也可将不同样品混合在一个分区测序，每个测序反应最多可完成 1536 个文库测序。 Ion Torrent  .Ion Torrent 是基于半导体芯片的新一代革命性测序技术，在简单、快速、准确、灵活和低成本方面占据优势。该技术使用了 一种布满小孔的高密度半导体芯片，