葛根素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的影响.pdfVIP

中国药物与lI缶床2014年9月第 14卷第9期ChineseRemedies＆Clinics，September2014，Vo1．14，No．9 ·1203 · · 基 础 研 究 · 葛根素对大鼠肾动脉血管平滑肌细胞 大电导钙激活钾通道 电流的影响 秦小江 侯晓敏 梁泰刚 葛根素是从豆科植物野葛或甘葛根的干燥根中提取的 肾动脉环 3次，当3次的收缩幅度相差不超过 10％时，则认 单体，其化学名为8一B—D一葡萄吡喃糖．4，7-二羟基异黄酮。据 为肾血管环的反应 良好，选取收缩张力达到2mN并且收缩 研究报道，葛根素具有多种药理学活性 ，包括降低血压[1_、舒 坪台稳定的肾血管环进行舒张实验 [。 张大鼠冠状动脉 【、改善急性心肌缺血_3_、清除氧 自由基 等， 用60mmol／LKC1预收缩肾动脉血管环达坪台。然后向 但关于葛根素对大鼠肾动脉的作用却未见报道。本实验主要 浴液中累积加入浓度梯度的葛根素舒张肾动脉，当前一浓度 研究葛根素对大鼠离体肾动脉的肌源性作用，葛根素对大鼠 舒张达平台时。再加入下一浓度。或者用60mmolL／KC1预收 肾动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道 (BK )电流的作 缩肾动脉血管环达平台时，向浴液中加入BK。阻断剂蝎毒素 用及其与过氧化氢 (HO：)的关系。 (Iberiotoxin，100nmolL／)，当再次达平台时，向浴液中累积加 1 材料和方法 入浓度梯度的葛根素舒张肾动脉 ．当前一浓度舒张达平台 1．1 试药和仪器 时，再加入下一浓度。以60mmo1]LKC1收缩肾动脉达平台时 1．1．1 药品与试剂 ：葛根素、木瓜蛋白酶、二硫丁四醇、胶原 的张力为 100％，计算不同浓度葛根素所致肾动脉张力所占 蛋白H、胶原蛋白F、白蛋白、HEPES均购 自Sigma公司。其 百分比。 余试剂均为国产分析纯，购 自武汉博士德公司。 1．2．2 大鼠肾动脉血管平滑肌细胞分离 ：按上述方法分离得 1．1．2 实验仪器：Powerlab张力换能系统 (埃德仪器公司，澳 到大鼠肾动脉血管环后 ，采用二步酶解法分离得到肾动脉血 大利亚)；微血管张力记录仪 (DMT公司，丹麦)；倒置显微镜 管平滑肌细胞。第 1步酶解：首先将肾动脉环置于 I号酶解 (奥林巴斯，日本)；膜片钳放大器 (AXON公司 ，美国)；电极 液中，即无钙 PSS液 (含有 0．5mgm／l木瓜蛋白酶 ，0．5mg／ml 拉制仪和抛光仪(Narishige公司，日本)。 二硫丁四醇，0．5mgm／l白蛋白)。在氧饱和且37cc恒温调节 1．1．3 实验动物：雄性 SD大鼠。3-4月龄 ，由山西医科大学 下孵育 30min。第2步酶解：将血管环从 I号酶解液中轻轻 实验动物中心提供，每5只一笼进行饲养，让大鼠自由摄食 拿出，置于 Ⅱ号酶解液中，即无钙PSS液 (含 0．5mg／ml胶原 和饮水。实验时用戊巴比妥钠(40mg／kg)麻醉大鼠。 蛋 白F，0．5mg／ml胶原蛋白H，0．5mgm／l白蛋 白)。在氧饱和 1．2 实验方法 且37qC恒温调节下孵育 15min。二步酶解结束之后。用巴斯 1．2．1 大鼠离体肾动脉肌源性实验：大鼠麻醉后，放血，取出 德管将细胞从细胞骨架上轻轻吹散下来．于离心机中离心后 其。肾Jj庄．放于4℃且氧饱和的PSS液中，PSS液具体成分为： 弃上清，再加入无钙 PSS液，保存于4℃冰箱 。 KC15．8 mmol／L，NaC1 144 mmol／L，CaC122．5 mmol／L，MgC12 1．2．3 全细胞膜片钳电生理学记录大鼠离体肾动脉血管平 1．2mmobL．HEPES5mmol／L．葡萄糖 11．1mmolL／。调整其