酶的固定化.pptVIP

背景知识：木聚糖是一种五碳糖，在植物体内大量存在，是植物细胞壁中的主要半纤维素成分。木聚糖酶是可以将木聚糖降解成低聚木糖和木糖的复合酶系。该酶在降解自然界中大量存在的木聚糖中起重要作用，同时还具有潜在的应用前景，如饲料，造纸，食品和能源工业等。广义的木聚糖酶是指能够降解半纤维素木聚糖的总称，狭义的降解仅限于内切β-1、4木聚糖酶。 实验目的 通过以木聚糖酶的固定化为实例，学习和掌握包埋法固定酶的基本原理和过程，掌握木聚糖酶分析方法。 实验原理 包埋法即将酶包裹于凝胶格子或聚合物半透膜微胶囊中的方法。 在酶悬浮液内加入丙烯酰胺单体和交联剂N，N′-甲叉双丙烯酰胺，然后再加入聚合反应的催化剂四甲基乙二胺（TEMED）、过硫酸铵，在光照条件下进行聚合反应，酶即被包围在聚合成的凝胶孔穴内。凝胶孔穴的大小是由聚合反应中的单体浓度和交联剂浓度决定的。一般孔穴的大小平均在1~4nm。这样的大小既保证菌体细胞不会散出凝胶之外，又能使底物分子能自由出入凝胶的孔穴。 木聚糖酶在一定条件下能水解木聚糖，释放出还原性木糖，还原性木糖能与DNS（3，5二硝基水杨酸）发生显色反应， 550 nm吸光度值在一定范围内与木糖的浓度成线形相关。 酶活力定义 在最适反应条件下，每分钟释放1mg木糖的酶量为一个酶活单位（U） * 木聚糖酶的固定化实验 实验步骤 木糖标准曲线的绘制 按下表制备不同浓度的