三疣梭子蟹水通道蛋白1 cDNA及其盐度胁迫下的表达分析.pdfVIP

中国水产科学 2014年 9月，21(5)：893—901 JournalofFisherySciencesofChina 研 究论 文 DOI：10．3724／SP．J．1118．2014．00893 三疣梭子蟹水通道蛋白1eDNA及其盐度胁迫下的表达分析 王渝L2，吕建建 ，刘萍 ，高保全 ，李健 ，陈萍 1．中国水产科学研究院 黄海水产研究所，农业部海洋渔业可持续发展重点实验室，山东 青岛 266071； 2．上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306 摘要：采用 RACE技术克隆获得总长为 1712bp的三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)水通道蛋白基因全长cDNA 序列，命名为PtAQP基因。该基 因5和3非编码区分别为 153bp和788bp，开放阅读框为 771bp，推测编码 256 个氨基酸，预测分子量为 27．0kD，理论等电点为8．26。生物信息学分析表明，PtAQP含有 6个跨膜区和 2个NPA 单元，具有与 MIP家族匹配的保守氨基酸序列，属于稳定蛋 白；同源性和系统进化分析表明，三疣梭子蟹 PtAQP 氨基酸序列与可口美青蟹(Callinectessapidus)AQP1的同源性最高(87％)，与可 口美青蟹紧密聚为一支；荧光定量 RT-PCR分析表明，P 9P基因在各组织中均有表达，而在胃中的相对表达量最高。通过分析PtAQ．P基因在盐度胁 迫中的表达规律发现，盐度胁迫可显著改变 PtA P基 因在三疣梭子蟹鳃和肝胰腺 中的表达模式，整体呈先下降后 上升最后下降到初始水平的表达趋势。该研究结果表明，PtAQ 基因在三疣梭子蟹渗透压调节中发挥重要作用。 关键词：三疣梭子蟹；水通道蛋白；盐度胁迫：基因克隆；基因表达 中图分类号：$917 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2014)05—0893—09 水通道蛋 白(aquaporin，AQP)是一类在细胞膜 度亲水环境阻碍了水溶液中离子的通过，所以水 上介导水分子及其他中性代谢分子跨膜转运的特 通道只允许水分子通过 J。另外，两个高度保守的 异性孔道，属于一个主要 内源性蛋 白(majorintr． 天冬氨酸一脯氨酸一丙氨酸(NPA)结构域位于水通 insicproteins，MIP)家族 。AQP最早从血红细 道三维结构的核心，在膜脂双层中间形成一个可 胞中分离纯化获得l引，在非洲爪蟾(Xenopuslaevis) 双向运输水分的孔道L1…。水通道蛋 白的这些特殊 卵母细胞表达系统中证实了其具有水通道的功能 。 结构使得水分能够顺畅地出入细胞，使细胞始终 研究表明，AQP在水分运输、离子选择透过性、渗 处在一个稳定的渗透压环境中。关于AQP的研究 透压调节等过程中均起到重要作用[5 。在渗透压 主要集中在植物和昆虫，在水产动物中仅有少量 作用下，水势的变化不仅影响到水通道孔道的开 相关报道。研究报道表明，AQP在金头鲷(Sparus 闭，而且会影响到水通道蛋 白的合成[1，而生物 aurata)[u】、黑鲷A(canthopagrusschlegeli)[]、斑马 体 中 70％一90％的水分是通过水通道进行转运的， 鱼(Daniorerio)[】、欧洲鳗鲡 nguillaanguilla)㈣ 因此 AQP在维持细胞 内外渗透压平衡中发挥着 和 日本鳗鲡 nguillajaponica)5J等鱼类的渗透压 关键的作用 ]。水通道管的空间尺寸限制了比水 调节中均发挥重要作用，但其在甲壳动物中的研 分子大的小分子的通过，与此同时水通道管的高 究尚未见报道。 收稿 日期：2013．12．26；修订 日期：2014．01．29． 基金项 目：国家高技术发展计划项 目(2012AA1OA4O9)；科技部农业科技成果转化资金项 目(2O13GB2326O589)；山东省 自主创 新专项(2013CXC80202)；中国博士后科学基金项 目(2013M531657)；中国水产科学研究院黄海水产研究所基本科 研业务费资助项 目(2O603022O13O27，206O3O22013O39)． 作者简介：王渝(1989