细胞松驰素B（CB）对水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存的影响.pdfVIP

维普资讯 HeilongjiangAnimalScience andVeterinaryMedicine No7 2008 细胞松弛素R 鲫母细胞玻璃 冷冻保存鲍影响 卞桂华，陈 自洪，杨 娟 ，陆凤花，石德顺 (广西大学 动物繁殖研究所，广西 南宁530005) 中图分类号：$823．83 文献标识码 ：B 文章编号：1004—7034(2008)07—0034—03 关键词：卵母细胞 ；囊胚 ；玻璃化冷冻 摘 要：研究主要探讨冷冻前细胞松弛素B(CB)预处理水牛M Ⅱ期卵母细胞对其冷冻效果的影响。 以水牛MⅡ期的卵母细胞为材料，通过玻璃毛细管 (GMP)和玻璃化冷冻液 EDS33(16．5％EG + 16．5％DMSO +Sucr0se)对水牛MⅡ期的卵母细胞进行两步法玻璃化冷冻保存，即卵母细胞首先放 入预平衡液(7．5％EG+7．5％DMSO+Sucrose)中平衡3min，然后再移入玻璃化冷冻液中30S后装 管直接投入液氮。冷冻前卵母细胞随机分为2组，一组用7．5 g／mLCB预处理30min，另一组未用 CB预处理作对照组。然后都冷冻保存。解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液 中进行的。解冻后存活 的卵母细胞进行孤雌激活，以分裂率和囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标。结果发现， GMP组和GMP+CB组卵母细胞解冻后的存活率(88．89％ 、94．20％)和培养后发育到囊胚的比率 (8．82％、14．55％)差异均不显著 (P 0．05)，但 GMP组和 GMP+CB组存活卵母细胞激活后 的分裂 率差异显著(32．69％、55．56％，P0．05)，所以细胞松弛素B预处理可以提高GMP冷冻卵母细胞的 发育能力 ． 过去科研人员常常集 中研究未成熟卵母细胞的 1．1 试验试剂及药品 冷冻，而对成熟卵母细胞的冷冻研究得较少，其原因 除TCM199为 GIBCO公司生产外，其他所有无 是MⅡ期的卵母细胞中纺锤体对低温和冷冻保护剂 机盐和生物化学试剂均 由Sigma公司生产。 极其敏感，结果在冷冻过程 中损伤 了卵母细胞 。因 1．2 培养液配制 此，如何降低低温和冷冻保护剂对卵母细胞的损伤就 卵巢保存及运输液：含有 K 、Ca 、Mg 的生理 成了卵母细胞和胚胎冷冻的研究热点。有文献报道 盐水 。洗 卵液：TCM199+5．0mmol／LNaHCO + 表明，细胞松弛素可以降低玻璃化冷冻过程中卵母细 5mmol／LHepes+2％发情牛血清 (ocs)。基础成熟 胞和胚胎的损伤。但有关 CB在卵母细胞玻璃化冷 液 (M)：TCM199+26．2mmol／LNaHCO +5mmol／L 冻过程中作用效果的报道很少，尤其是 CB预处理水 Hepes+7％OCS+0．1lxg／mLFSH。胚胎培养液 牛卵母细胞后再冷冻未见报道 ，仅有几篇报道 的结果 (CM)：TCM199+26．2mmol／LNaHCO3+5mmol／L 也常常是矛盾的。有报道证实，CB提高了猪未成熟 Hepes+5％ocs。冷冻基础液：含 15％胎牛血清 卵母细胞的存活率，但在牛上没有发现提高牛卵母细 (FCS)的 TCM199一HEPES缓 冲液。冷 冻液 1： 胞的存活率。为此，试验就细胞松弛素 B对卵母细 7．5％EG+7．5％DMSO+0．5m0l／／L蔗糖 +冷冻基础 胞玻璃化