生长相关蛋白-43影响神经细胞分裂方向作用的研究.pdfVIP

圜 ChinJStroke，Feb2015，VoltO，No．2 · 论著 · 生长相关蛋白--43影响神经细胞分裂 方向作用的研究 一黄蕊 ，文玉军 ，鞠莉莉。 基金项 目 【摘要】 国家 自然科学基金 目的 研究生长相关蛋白一45(growthassociatedprotein一45，GAP一45)与G蛋白对神经细胞分裂方向 f8120095】1 的调控，探讨GAP45参与神经发生的机制。 作者单位 方法 6~C57BL／6JGAP43高表达的转基因孕鼠 (El5．5d和El7．5d的胎鼠均为24只)为实验组，6 100020北京 只野生型孕鼠 (El5．5d和El7．5d的胎鼠均为24只)为对照组。分别取El5．5d的5只实验组及对照组胎 首都儿科研究所儿科临 床病理生理研 究室 鼠，脑室区进行免疫荧光染色测定GAP--45的表达位置；再分别取El5．5d的12X实验组及对照组胎 宁夏 医科 大学基础 医学 鼠，向脑中加入裂解液分别提取膜蛋白和细胞质蛋白，通过Westernblot~4定GAP43的表达位置及 院 表达量；取E17．5d的5~GAP--45高表达的转基因胎鼠的鼠脑进行GAP-43和G蛋白的免疫荧光共染色， 。首都 医科大学神经生物 观察二者的共定位情况；取E17．5d的9~GAP--45高表达的转基因胎鼠的鼠脑进行免疫共沉淀 (co— 学系 immun叩reci口Itation，co-IP)栓#~lGAP--45与Gd悯 的相互作用。取El5．5d和El7．5d的9只实验组胎鼠计 通信作者 数转基因胚胎鼠脑中神经前体细胞 (IleUPOprogenitorcell，NPC)中沿水平和垂直不同方向分裂的细胞 黄蕊 数量，并与对照组小鼠进行对照。 huangrui — alice@126．com 结果 El3．5d实验组胎鼠的GAP43蛋白的表达量高于对照组 (P0．05)；GAP-43特异性表达于细 胞膜上；免疫荧光共染色结果表明GAP-46与GⅨj共定位于细胞膜上，进一步通过co-IP证明GAP--43和 Gd湘互结合；E15．5d时，转基因组与对照组相比，细胞沿水平、中间和垂直角度分裂的细胞数量差异 有显著性 (P0．05) 结论 GAP-46可调控神经细胞分裂方向，这可~ GAP--45参与神经发生的机制。本研究为进一步 研究GAP一45对卒中后神经损伤修复的作用机制提供基础。 【关键词】 生长相关蛋白；转基因小鼠；G。li；细胞分裂平面；神经发育 IDOl】 10．3969／j．issn．1673--5765．2015．02．006 GrowthAssociatedProtein一43InfluencestheOrientationofCellDivision intheBrain HUANG Rui，WEN Yu—Jun，JU Li—Li． ClinicalPhysiologyResearchCenter,Capital InstituteofPediatrics，Beijing100020，China CorrespondingAuthor：HUANGRui, E—mail：huangrui _ alice