AP020_聚乙烯亚胺和聚乙二醇磺酸酯接枝反应的研究.pdfVIP

聚乙烯亚胺和聚乙二醇磺酸酯接枝反应的研究 1 1 1 1 1 1 2 赵金铠 ，董庆 ，刘瑞鹏 ，黄长荣 ，宁强 ，于静 ，金仁华 1. 青岛迪爱生精细化学有限公司，青岛市 266101 2. DIC株式会社综合研究所，佐仓市 2858668 关键词：聚乙烯亚胺 聚乙二醇磺酸酯 接枝反应 水性凝胶渗透色谱 前言 近年来，非病毒基因治疗载体由于具有价格低、操作简单、安全性高等特点而 备受瞩目。其中 1995 年发现的阳离子聚合物聚乙烯亚胺 (PEI) 因具有转染效率高 等优点，是目前应用最广泛的非病毒载体之一 ［１］ 。此外，PEI 类高分子及其衍生 物还是重要的工业原料和应用广泛的各类工业助剂如粘合剂和絮凝剂等。但是， 由于 PEI 渗透作用强，可以破坏细胞的溶酶体膜，在医学应用中显示出显著的生 物毒性，而引入无毒和抗免疫原性的水溶性聚乙二醇（PEG ）对其进行修饰是改善 其生物相容性的重要手段之一，在工业上则是调节其与不同体系相容性和加强其 功能的有效方法之一。 利用 PEG 修饰PEI的方法很多，主要是利用具有特异活性的PEG中间体与PEI ［２］ ［３］ 反应，如含琥珀酰亚胺酯 或异氰酸酯 端基 PEG 等，其中通过聚乙二醇磺酸 酯与 PEI 接枝是最简单有效的方法之一。由于 PEI 类阳离子聚合物极易与各类色 谱固定相发生吸附，对其及其衍生物的分子量和分子量分布的准确分析一般很难 ［４］ 实现 且其它检测手段也很稀少，对该类反应的系统研究尚未见报道。本文利用 ［５］ 公司内部开发的更加准确的水性凝胶渗透色谱分析技术 和核磁共振氢谱研究了 该反应的进程，观测到了中间态大分子聚集体向产物的转化，确认了所用助剂的 作用和反应的适宜条件，为该类化合物的进一步开发应用打下了基础。 实验部分 1 药品及试剂 聚乙烯亚胺（PEI ）为日本触媒产高分子化合物，分子量为 10000; 聚乙二醇对 甲苯磺酸酯（PEG-OTs）和聚乙二醇甲磺酸酯（PEG-OMs）为自制产品。无水碳酸 钾为分析纯试剂，购自上海国药集团化学试剂有限公司。 凝胶渗透色谱标样为 Varian 公司聚乙二醇(PEG)产品，纯水由 Millipore 超纯水 离子交换器制得。 2. 仪器设备 凝胶渗透色谱（GPC）：美国Waters公司 515 HPLC 泵，示差（RI）检测器，PL auqagel-OH 30, PL aquagel-OH 30和PL auqagel-OH 40三柱串联色谱柱。流动相 为NaAc-HAc缓冲溶液，流速1.0ml/min，进样体积为200µL 。 核磁共振（NMR ）：瑞士布鲁克公司AVANCE 400 超导脉冲傅立叶变换核磁共 振谱仪，400MHz 场强，5mm BBO 探头(带梯度场) 。 3. PEG 与 PEI 共聚物的合成 在装有冷凝管和温度计的四口烧瓶中，加入 5 克 PEI （分子量10000，0.5 毫摩 尔）中。然后向其中加入 4 克 PEG-OTs （分子量1850，2.1 毫摩尔）搅拌溶解。在 适当时间可补加 0.7 克无水碳酸钾。室温或者加热状态下反应并在不同时间取样， 除去溶剂处理后进行分析。 结果与讨论 如前所述，利用聚乙二醇磺酸酯与聚乙烯亚胺 （PEI）接枝可以实现对聚乙烯 亚胺的修饰，即合成二者的嵌段共聚物PEG-b-PEI。由于长链高分子化合物的反应 性很低，它们之间的反应并没有象相应的小分子有机化合物那样容易进行。本文 首先研究了PEI与聚乙二醇对甲苯磺酸酯（PEG-OTs，分子量为1850）的反应（见 Scheme 1），并进而实现了前者与聚乙二醇对甲磺酸酯的反应。