儿茶素对小鼠巨噬细胞VCAM-1表达的影响.pdfVIP

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2011Mar；27(3)：443-4 ·443 · 儿茶素对小鼠巨噬细胞VCAM-1表达的影响 赵兴梅，范春雷 (浙江中医药大学生命科学学院，杭州浙江 310053) E仃ectofcatechinonexpressi0nofvascularcelladhe- +终浓度为 12mg·L 的OX—LDL；,~I药组：加入 5Inl完全培养 sionfactor一1inmousemacrophages 液+终浓度为 12n1g·L 的OX—LDL和终浓度分别为5、15、25 ZHA0Xing．mei，FAN Chun．1ei m0l·L 的儿茶素。各组置体积分数为0．05的CO2，370C培 ( ScienceCollege，ZhejiangChineseMedicalUniversity，Hang- 养箱培养24h。分批提取细胞总RNA和细胞总蛋白后，通过实 zhou 310053，China) 时荧光定量 PCR法，Western blot法和 ELISA法检测各组 中 国 图 书 分 类 号：R一332；R284．1；R392．12；R543．502．2； VCAM一1的表达量，具体方法如下： R543．505．31 实时荧光定量PCR逆转录为CDNA按照M—MLV(RNase 文献标识码：A 文章编号：1001—1978(2011)03—0443—02 H)逆转录试剂盒说明进行。引物：Sense：5-GTITGGCTCCAGA· 关键词：血管细胞黏附因子一1；JL茶素；抗氧化；巨噬细胞；氧化 CATITACCC一3 ， Anti—sense： 5t_TGTAGTI℃TITGACAG1℃TC— 低密度脂蛋白；动脉粥样硬化 CCTIIET1T一3，产物大小：246bp。 Key words：VCAM一1；catechin；antioxidation；macrophages；OX— 用小鼠B—actin作内参基因(ref)。各组的目的基因和内参 LDL：atherosclerosis(AS) 基因均做3个重复。按BioEasySYBRGreen试剂盒说明进行。 1．3 数据分析 各组实时定量PCR结果的ct值计量资料数据 血管细胞黏附因子介导的血管炎性病变是很多疾病 [如动 用x±S表示，以2 △c法进行基 因表达量 的半定量分析。 脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)[11、风湿病、肾病等]共同的病理 Westernblot检测VCAM一1蛋白的表达，利用凝胶成像系统对蛋 基础。研究发现 AS的血管壁中有VCAM-1的大量表达。过 白条带图像进行采集。ELISA检测VCAM一1的表达，按照Solu— 量表达的VCAM．1介导的炎症反应参与了As发生发展的全过 blemouseVCAM一1ELISAKit说明书进行。 程 J。儿茶素(catechin)是从茶叶中提取的酚类物质，有 良好的 2 结果 调血脂抗As作用。本实验以小鼠巨噬细胞RAW26．7为材料， 2．1 儿茶素对RAW264．7细胞增殖活性的测定 MTF结果表 考察儿茶素对oxLDL诱导 的巨噬细胞VCAM一1表达的影响， 明，与阴性对照组相 比，儿茶素在0～25gmol·L 内对 探讨儿茶素抗As的可能机制。