华支睾吸虫吉林分离株的鉴定.pdfVIP

动物医学进展，20ll，32(3)：37—40 ProgressinVeterinaryM edicine 华支睾吸虫吉林分离株的鉴定 刘国兴，陈根源，于建利，吴秀萍 ，王子见 ，贺亚奇，刘明远，王 峰 (人兽共患病研究教育部重点实验室，吉林大学人兽共患病研究所 ， 吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 130062) 摘 要 ：为了研 究吉林省 内华支睾吸虫 自然分离株的种类及基 因变异情况，将镜检含有疑似华支睾吸虫 囊蚴的麦穗鱼，经 胃蛋 白酶消化后获得该寄生虫囊蚴，用比重沉降法去除杂质 ，同时利用形态学和 PCR方法 进行种类鉴定。镜检结果表 明分离株具有典型的华支睾吸虫囊蚴特征，并且经过 PCR方法扩增 出了华支睾 吸虫的种特异性基 因片段 ，碱基序列与GenBank注册的华支睾吸虫特异性基 因序列(越南分离株)同源性达 1OO％，与文献 中提供序列 (中国南方分离株)的同源性也为 100％。结果表明在吉林省内成功的分离到 了华 支睾吸虫囊蚴 ，其特异性基 因片段与越南分离株和中国南方分离株相 比未发生变异。 关键词：华支睾吸虫；囊蚴；分离；鉴定 中图分类号 ：$852．735 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5O38(2On)O3—0037-04 华支睾吸虫病 (Clonorchiasis)是 由于感染华支 1．1．2 试剂 胃蛋 白酶为中国惠世生化试剂有限 睾吸虫 (Clonorchlssinensis，Cs)引起 的食源性人兽 公司产品，胰蛋 白酶为美国Amresco公司产 品，TI— 共患寄生虫病，严重危害人类的健康。该病主要分 ANampGenomicDNA Kit(DP304)、TaqDNA 聚 布在东亚、东南亚和东欧的部分国家 ，如中国、韩 国、 合酶、dNTPs均为天根生化科技 (北京)有限公司产 老挝和越南等。据统计全球约有 3500万人感染这 品，DNA凝胶 回收试剂盒 为 Axygen公 司产 品，其 种吸虫 ，其中 1500万人分布在我国的各个省市区 他试剂均为北京化工厂产品。 (除内蒙古 、青海、西藏和新疆外 ，均有发现)，以广 1．2 方法 东 、广西和东北三省尤为严重[】]。 1．2．1 囊蚴的分离 将麦穗鱼用清水洗净，去除鱼 目前 ，华支睾吸虫 的鉴定方法还没有统一的标 头、鱼尾 、鱼鳍 、鱼刺及内脏，将鱼 肉用绞肉机加工成 准 ，最简单的方法是根据其形态学特征进行鉴定，但 肉泥 ，放入玻璃杯 。按每克鱼 肉加入 10mL人工 胃 对于那些与华支睾吸虫生物学特征十分相似的寄生 液 (盐酸浓度为8mL／L，胃蛋白酶浓度 8g／L，氯化 虫，使用这种方法往往会 出现误判 。随着分子生物 钠浓度为 9g／L)，37℃孵箱作用 2h，将消化完全的 学研究技术的不断发展，PCR方法也应用于寄生虫 鱼肉消化液经 8O目分离筛过滤集 中于 2L的分液 的鉴定 ]。本文分别应用 了形态学、多重 PCR和套 漏斗 中沉 淀 0．5h，放 出约 300mL的消 化 液 至 式 PCR方法对采 自吉林省白城市 的疑似华支睾吸 虫囊蚴进行 了鉴定 ，同时将该株囊蚴的种特异性基 500mL的烧杯 中，沉淀 10min～30min后 ，弃 去上 因片段分别与越南和中国南方华支睾吸虫分离株进 面的浊液，用清水反复清洗至液体清亮 ，随后将含虫 行 了比较，并分析了该基因的变异性 ，为研究华支睾