巨噬细胞条件培养基对胰岛素调节骨骼肌细胞作用的影响.pdfVIP

142 TianjinMedJ，Feb2011，Vol39No2 实验研究 巨噬细胞条件培养基对胰岛素调节骨骼肌细胞 作用的影响 刘 婕 李金茹 牛文彦 摘要 目的：探讨常氧和缺氧培养的巨噬细胞条件培养基对胰岛素调节骨骼肌葡萄糖转运子4(GLuT4)作用的 影响。方法：常氧和缺氧培养巨噬细胞，提取条件培养基孵育C2C12GLUT4myc骨骼肌细胞，用偶联抗体的吸光度法 测定细胞膜上GLUT4myc的含量 ，Real—timePCR法测定巨噬细胞TNF一 mRNA的表达 ，ELISA法测定巨噬细胞条件 培基中TNF—o的【含量。结果：常氧和缺氧培养的巨噬细胞条件培养基削弱胰岛素刺激的骨骼肌细胞GLUT4m~转位 0．O11，但两种条件培养基对骨骼肌中胰岛素作用的影响差异无统计学意义；缺氧培养的巨噬细胞TNF一仅mRNA 和蛋白表达均高于常氧培养的巨噬细胞(P0．05或P0．01)。结论 ：常氧培养和缺氧培养的巨噬细胞条件培养基均 直接造成骨骼肌细胞胰岛素抵抗，缺氧的巨噬细胞条件培养基并不能加重骨骼肌胰岛素抵抗。 关键词 巨噬细胞 缺氧 葡萄糖转运体1型 葡萄糖转运体4型 肌，骨骼 胰岛素抗药性 肿瘤坏死因子仪 TheEffectoftheMacrophageConditionedMedium onlnsulinFunctionof SkeletalMuscleCells LIUJie，LIJinru，NIUWenyan DepartmentofImmunology, 0 nMedicalUniversity,孔0 n300070,China Abstract Objective：Toexploretheeffectsoftheconditionedmedium(CM)fromnormoxia-treatedandhypoxia-treat- edmacrophagesoninsulin-regulatedglucosetransporter4(GLUT4)inskeletalmusclecells．Methods：Themtierophages were cultured under normoxia or hypoxia condition，respectively．The CM was collected and used to incubate C2C12GLUT4m~ skeletalmusclecells．ThelevelsofGLUT4myconthecellsurfaceweremeasuredbyanantibody—coupled absorbanceassay．ThemRNAexpressionofTNF-~inmacrophageswasdeterminedbyreal-timePCR．ThelevelsofTNF-~ inthemediaofmacrophagesweredeterminedbyELISA。Results：Theincreaseofinsulin-stimulatedGLUT4myctransloca— tionwasimpairedunderincubationwithCMfrombothnormoxia—andhypoxia—treatedmacrophagesfP0．01)．Buttherewas nodifferenceintheinsulinfunctionofskeletalmusclecellsbetweentwoCMs．BothmRNAandproteinexpressionofTNF-a werehigherinCMofhypoxia-treatedmaerophagesthanthoseofnormoxia—treatedones O．05orP0．O1)．Conclusion： Theconditionedmedium frombothnormoxia-andhypoxia-trea