登革2型病毒粘附人血小板的体外研究初探.pdfVIP

第36卷 第 1期 贵 阳 医 学 院 学 报 Vo1．36 No．1 2011年2月 JOURNALOFGUIYANG MEDICALC0LLEGE 20l1．2 登革 2型病毒粘附人血小板的体外研究初探水 张 敏，商正玲，左 丽 (贵阳医学院免疫学教研室，贵州 贵阳 550004) [摘 要]目的：了解登革2型病毒(DEN-2)是否能在体外粘附人血小板并制备抗人血小板抗体。方法：密度 梯度离心法分离血小板 ，DEN-2与血小板体外共孵育2h，间接免疫荧光法分析DEN-2粘附人血小板情况。采用 TritonX-100裂解法制备血小板蛋白并经皮下注射免疫BALB／C小鼠获取抗血小板血清，经Westernblot、间接免 疫荧光及间接ELISA对抗血清进行鉴定及效价测定。结果：间接免疫荧光法提示 DEN-2可体外粘附人血小板； Westernblot、间接免疫荧光法表明获得特异性抗人血小板抗体，间接 ELISA测定抗体效价可达到 1：12800。结 论：DEN-2能够在体外粘附人血小板，血小板蛋 白免疫BALB／C小鼠后可产生较高效价的抗人血小板抗体，为 今后研究血小板在DEN-2感染中的免疫学功能奠定一定的基础。 [关键词]登革热病毒；血小板；抗体；荧光免疫测定；小鼠，近交BALBC [中图分类号]R373．33 [文献标识码]A [文章编号]1000．2707(2011)01-0005-04 A PreliminaryStudyonAdherenceofType2Dengue VirustoHumanPlateletsin Vitro ZHANG Min，SHANG Zhengling，ZUO Li (DepartmentofImmunology，Gu@angMedwalCollege，Guiyang550004，Guhou，China) [Abstract]Objective：Toinvestigatewhethertype2denguevirus(DEN-2)couldadheretohuman platelets(PLT)invitroandtopreparemouseantih·umanplateletantibody．Methods：Densitygradi— entcentrifugationwasusedtoisolatePLT．DEN-2wasCO—culturedwithhumanPLTfor2hours．DEN- 2adheringtoPLTwasdetectedwithindirectimmunofluorescenceassay(IFA)．Theantiseurmagainst PLTwaspreparedbysubcutaneousinjectionofPLTproteinsextractedwithTritonX一100intoBALB／C rats．Thespecificityofanti．PLTantibodieswasidentifiedbyWesternblotandIFA．Titrationofthem wasexaminedwithindirectELISA．Results：DEN-2couldadheretohumanPLT．Thespecificanti— humanPLTantibodieswereobtainedbyWesternblotandidentifiedbyIFA．Thetitrationoftheanti— bodieswas1：12800detectedbyindirectELISA．Conclusions：DEN-2couldadheretohumanPLT n vitro．Specificanti—humanPLTantibodieswithhightitrationcouldbepreparedbyimmunizingBALB／ CmicewithPLTproteins．Th eseresultslayafoundationofrfurtherstudyofPLT i