脑络欣通与左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的影响.pdfVIP

脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化 的影响 唐巍王键陈业农 安徽中医学院(合肥230038) 摘要目的探讨脑络欣通药物血清和左归丸药物血清对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞增 殖分化的影响。方法分别采用舍10％脑络欣通药物血清和合10％左归丸药物血清的培养 基培养大鼠胚胎神经干细胞，观察其促增殖效应和诱导分化效应，应用相差显微镜和免疫荧 光染色对其进行比较观察。结果脑络欣通药物血清和左归丸药物血清均可诱导绝大多数神 经干细胞分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。此外，两者还能在一定程度上促进 培养的神经干细胞生长。前者诱导NSC分化的进程虽比后者要慢，但诱导NSC向神经元方 向分化的比率较高，其分化的神经元在细胞形态学上与发育成熟的神经元更为接近；后者促 进神经干细胞生长的效应较为显著。结论脑络欣通和左归丸均能促进体外培养的神经干细 胞生长和分化，两者作用有一定差异；益气活血治法和补肾生髓治法对NSC进行诱导分化 具有一定的可行性． 关键词分化脑络欣通神经干细胞药物血清增殖左归丸 依据中医脑髓理论和气血相关理论，肾精、气血对脑髓的生成、充满、化生起至关重要 stem 的作用。神经干细胞(neural cell，NSC)的增殖、分化是胚胎发育期及其后成体神经细胞 形成的源泉，与脑髓有一定的相关性。益气活血治法和补肾生髓治法可以加强肾精、气血对 腑髓的化生作用，其对NSC的增殖与分化有无影响?作用有无差异?我们既往的研究结果表 明，具有益气活血功效的中药复方脑络欣通可阻促进缺血性脑卒中神经功能恢复【”，是否可 能通过影响NSC的增殖分化从而发挥修复作用?目前尚不清楚。为此，本课题用细胞培养 和血清药理学的方法，比较观察了中药复方脑络欣通药物血清和左归丸药物血清对体外培养 的大鼠胚胎NSC生长和分化的影响，探讨具有益气活血功效的中药复方脑络欣通和具有补 肾生髓功效的左归丸对培养的NSC进行诱导分化的可行性，为中医药干预中枢神经系统 nervous (central system，CNS)的再生和功能重建研究提供理论基础。 材料和方法 1材料 1_1实验动物 孕14d的Wistar大鼠2只，清洁级，由中国科学技术大学实验动物中心提供，许可证号： 由河南省实验动物中心提供，合格证号：4104035。 1．2主要试剂 (recombinatehumanbasicfibrobl∞t growthfactor，rhbFOF)、重组人表皮生长因子 (recombinatehuman epidermalgrowth 116 acidic fibrillary (Sigma)：兔抗胶质纤维酸性蛋白(glial protein，GFAP)多,克隆抗体(武汉博 士德)：小鼠抗巢蛋白(nestin)、抗微管相关蛋I刍(microtubule·associatedprotein，MAP一2)、 goat goat (Cy3-eonjugated anti·rabbit IgG)(Chemicon)。 2方法 2．I药物血清制备 大鼠用药等效剂量按成人临床日用量与体重折算系数比．计算出相当于中剂量的用药 量，脑络欣通为8．549／kg／d，左归丸为2．19／kg／d。脑络欣通中药汤剂由安徽中医学院中药制 剂室制各，相当于原生药5g／ml；左归丸为河南省宛西制药股份有限公司生产，加ddH20 配制成含左归丸0．29]ml的混悬液。用时将制剂按一定标准(人鼠每次灌服中药量：Iml／2009 体重)稀释。一日剂量于固定时间每天灌胃2次，每次间隔4h。给药时间为3d．第3d采血 前禁食12h，于第二次给药2h后麻醉，无菌条件下腹主动脉取血【，分离血清。564C灭活30min， 2