银杏叶多糖抗炎及抑制P-选择素介导白细胞粘附作用研究.pdf

摘 要 它包括致炎因子引起的损伤、机体防御性反应和组织损伤恢复三个方面。适度的炎症 反应是机体保护自我的一种免疫过程，而过度的炎症反应会导致机体的免疫损伤甚至 危及生命。白细胞是机体的重要炎性细胞，其粘附并穿越血管内皮细胞向炎症部位移 行是炎症的重要标志，而白细胞和血管内皮细胞所表达的粘附分子与相应配体的结合 是炎症反应产生的重要分子基础。 选择素(selectin)是细胞粘附分子的一个家族，主要功能是在炎症发生时介导 白细胞与血管内皮细胞，以及白细胞与白细胞或血小板之间的粘附。P一选择素 kDa的跨膜糖蛋白。它在炎症过程的早期甚为重要，而在炎症晚期则要同其他选择素 协同发挥作用。P一选择素可通过与相应配体PSGL-1(P—selectin ligand一1)等的相互作用介导白细胞在活化血管内皮细胞上的滚动。因此，发现有效 的P一选择素配体类似物，寻找或合成具有影响P一选择素表达及功能的药物，将为炎 症发病机理的揭示及治疗提供新的手段。 植物多糖是无毒的天然物质，具有较多生物活性。临床研究表明，许多植物，如 黄芪、香菇和枸杞等多糖都具有抗急性炎症作用。但由于多糖的结构成分复杂，纯化 of biloba Ginkgo 具有明显的抗炎活性，但其分子机理还不清楚，许多问题有待于进一步阐述。 本研究通过水煮、醇沉、干燥获得了PGBL，经进一步反复冻融、超滤和凝胶层析， 清PGBL的抗炎作用，我们建立了小鼠急性腹腔炎症模型，通过检测小鼠耳肿胀度及 观察小鼠腹腔白细胞和中性粒细胞数，研究了p-PGBL的抗炎效果。为研究PGBL的 抗炎机制，我们首先利用流式细胞仪，并通过P一选择素及其阻断性抗体9El的标记， 检测了p-PGBL对P一选择素与其配体相互作用的影响。然后又以筛选出的稳定表达 理状态的层流实验，对来自于人早幼粒白血病细胞系(HL一60细胞)和中性粒细胞的 滚动和粘附进行检测，观察p-PGBL对它们的影响。为进一步探讨PGBL的抗炎分子 veinendothelial 机制，我们分离了人脐静脉内皮细胞(Humanumbilical cells， 影响。 子量约10 葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖醛酸，摩尔比为：6：2．4：1．7：4．6：6．8：1。 抗炎作用与肝素相似，都能抑制小鼠腹腔中性粒细胞渗出。流式细胞仪检测结果表明， 提示PGBL的抗炎机理主要是充当P一选择素的配体类似物，阻断P一选择素与其配体 的相互结合，抑制白细胞的跨血管渗出。模拟毛细血管生理状态的层流实验结果表明， 在层壁剪切力为1．0 细胞及中性粒细胞在层流状态下与CHO-P细胞的滚动和粘附，说明在接近生理流动条 细胞与活化血管内皮细胞的粘附。这个结果通过HUVEC的层流实验得到进一步证实。 的滚动，但仅部分阻断在HUVEC上的滚动，表明在炎症反应过程中，除P一选择素以 外其它粘附分子或炎症因子也参与了中性粒细胞的滚动。对于p-PGBL是如何参与阻 断其它粘附分子或炎症因子的作用有待进一步研究。 我们的实验证明，PGBL有抗炎作用，其主要分子机制是通过有效阻断P一选择素与 其配体的相互作用抑制中性粒细胞渗出。本研究不仅为深入阐明PGBL抑制白细胞粘 附的抗炎分子机制，促进和发展多糖的抗粘附治疗理论，筛选高效无毒的多糖抗炎药 物提供了有价值的实验证据。而且也为银杏资源的开发和利用提供了新的途径。 关键词：银杏叶多糖：抗炎；细胞粘附抑制；P一选择素 Ⅱ ABSTRACT Inflammationisa reactionof withvasculartoinvasive protective livingorganisms system asthe factors．Itmanifests ofinflammationdefensivereactionof