·综述·中医药抗脑缺血神经细胞凋亡的研究进展.docVIP

第21卷　第3期　　　　　　　　　　　安　徽　中　医　学　院　学　报　　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ21　Ｎｏ3　2002年6月　　　　　　　　　　　ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＨＵＩＴＣＭＣＯＬＬＥＧＥ　　　　　　 Ｊｕｎ2002　 ·综　　述·中医药抗脑缺血神经细胞凋亡的研究进展 李　净 导师:王键教授(安徽中医学院,安徽合肥　230038)　 　关键词:脑缺血;细胞凋亡;中医药　　中图分类号:Ｒ743　 文献标识码:Ａ　文章编号:1000-2219(2002)02-0053-04　　 细胞凋亡(ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是近年来生命领域里的热点问题,是由英国科学家ｋｅｒｒ等[1]于1972年首先提出。它是一种由基因控制的细胞自主性死亡,是真核细胞在生理或病理条件下接受到某种信号的刺激,启动其自身的遗传机制,通过内源性ＤＮＡ内切酶的激动而发生自动化死亡的过程[2]。目前的研究证实了脑缺血损伤中有细胞凋亡的存在,尤其在再灌注损伤中起重要的作用,抑制细胞凋亡可以减轻脑缺血损伤的程度。 细胞凋亡与脑缺血细胞凋亡具有以下形态学和生物化学特征: ①细胞皱缩,出现凋亡小体;②凋亡细胞和凋亡小体迅速被吞噬细胞吞噬,整个过程无炎症反应;③核染色质浓缩,沿着核膜排列,ＤＮＡ裂解为180～200ｂｐ的片断,其电泳时呈特征性的梯形改变。目前实验研究发现,在脑缺血急性期,细胞坏死和细胞凋亡并存,细胞坏死主要位于缺血中心区,而细胞凋亡主要出现在缺血半暗带;而在脑缺血迟发性神经细胞死亡中,则以细胞凋亡为主。ＭａｃＭａｎｕｓ等[3]研究表明在大鼠短暂性全脑缺血后,海马ＣＡ1区及纹状体背侧神经组织ＤＮＡ提取物电泳呈梯形改变,且ＤＮＡ损伤程度和缺血时间呈正比关系。Ｈｅｒｏｎ等[4]在大鼠一过性前脑缺血模型的研究结果表明,凋亡细胞存在于缺血周边区,轻度缺血及再灌注损伤易触发凋亡细胞,严重的缺血引起能量衰竭导致细胞内钠、钙升高,使细胞溶解。Ｌｉ等[5]利用大鼠及沙土鼠等复制了一系列局部及前脑缺血再灌注模型,通过免疫组化复染、分子生物学等手段研究了鼠脑缺血再灌注后神经细胞内ＤＮＡ断裂数、Bcl-2蛋白、Ｆａｓ抗原ｍＲＮＡ和即早基因的表达,结果发现在轻度缺血区及重度缺血非病变区神经细胞和非神经细胞诱导早期基因蛋白的表达,也可能诱导Bcl-2的表达。Ｉｗａｉ等[6]在沙土鼠一过性前脑缺血模型中,采用原位缺口末端标记法发现,缺血再灌注72ｈ后海马ＣＡ1区内侧部分神经细胞出现ＤＮＡ断裂,7ｄ后整个海马ＣＡ1区神经细胞出现ＤＮＡ断裂;而在ＣＡ2及ＣＡ3区尽管缺血再灌注后48ｈ出现明显的神经损伤,但始终未出现ＤＮＡ断裂。细胞凋亡的机制尚未阐明,可能与脑缺血再灌注损伤产生的自由基、兴奋性氨基酸、Ｃａ2+内流与蛋白质的磷酸化等因素有关,更重要的是与此时细胞内活跃的基因表达有关[7]。 脑缺血时细胞凋亡的基因调控 由于凋亡是一个严格控制、有序的死亡过程,因此,凋亡过程中必须有一系列基因的参与和调控。这些调控基因包括Bcl-2基因家族,ｐ53、ｉｃｅ基因家族和即早基因(ｉｍｍｅ ｄｉａｔｅｅａｒｌｙｇｅｎｅ,ＩＥＧ)等。Bcl-2基因家族有15种之多,Bcl-2和Bcl-xl主要分布在线粒体膜与细胞质中,具有拮抗细胞凋亡的作用;而Bcl-xl、Ｂａｘ、Ｂａｄ、Ｂａｇ 1、Ｂａｋ和Ｂｉｄ则分布于细胞质中,具有促进细胞凋亡的作用[8]。Bcl-2基因阻止凋亡的可能机制是通过阻止受损ＤＮＡ转录出对凋亡相关基因有激活作用的信号,或阻止这些相关基因的产物发挥作用;Ｂａｘ则功能与Bcl-2相反。Ｂａｘ Ｂａｘ同源二聚体可促进凋亡,Ｂａｘ Bcl-2异源二聚体抑制凋亡。Bcl-2在脑缺血中抑制凋亡的机制可能有:①通过二聚体的调节来拮抗细胞凋亡;②防止线粒体细胞色素Ｃ的释放;③对Ｃａ2+稳态的调节;④对线粒体渗透性转运进行调节;⑤抑制自由基产物的聚集等。ｐ53基因控制细胞周期和ＤＮＡ修复,介导细胞凋亡,野生型ｐ53基因对细胞凋亡起促进作用,突变型ｐ53则促进正常细胞转化[9]。正常ｐ53在细胞生长过程中作为一种“分子警察”监视细胞内ＤＮＡ状态,若ＤＮＡ受损,Ｐ53蛋白水平就增高,则ｐ21基因表达,其蛋白产物聚集于细胞核,通过抑制各种ｃｙｃｌｉｎ ｃｙｃｌｉｎ依赖性激酶复合体的功能在细胞周期中起到抑制作用,以终止增殖,使受损细胞获得修复ＤＮＡ的时间;若ＤＮＡ受损无法修复,则Ｐ53蛋白持续升高,引起细胞凋亡。Ｐ53蛋白一般通过三个步骤来造成细胞凋亡:①通过转录诱发氧化还原基因;②通过制造活性氧因子;③氧化破坏线粒体的细胞膜,使细胞死亡。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(ｃａｓｐａｓｅ)是细胞凋亡的核心所在,各种引起凋亡的因素,如Ｆａｓ死亡因子、ＴＮＦ、