一种新型酿酒酵母附加型分泌表达载体的构建.pdfVIP

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 %’ (! . (! 年 月 ## $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ## !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 一种新型酿酒酵母附加型分泌表达载体的构建 ， 1 1 赵颖怡 梁世中 黄 鲲 黄日波 1 （华南理工大学食品与生物工程学院 广州 B1#/!# ） 广西大学生物技术实验中心发酵与酶工程研究所 广西大学生物糖业学院 南宁 ） （ B0###B 摘 要：用化学法合成克鲁维酵母的菊粉酶基因的信号肽序列（ ），将其嵌入酵母附加型表 C.D 达质粒 ，得到一套新型的分泌表达载体 ， ， 。然后用 方法分 EFG EFG C EFG ! EFG HIJ 别扩增大肠杆菌的天冬酰胺酶基因（ ）和短芽孢杆菌 乙酰乳酸脱羧酶（ ）基因，连接 )G. 2 )KLI # 到C.D 下游，得到重组质粒)G. 和)KLI。分别将这两个重组质粒转化酿酒酵母菌株C.2 %G= 中表达，胞内和胞外的酶活分析表明)G. 和)KLI 基因都能在酿酒酵母中分泌表达，表 $ 明菊粉酶信号肽序列能很好地将酿酒酵母中的重组蛋白分泌到胞外。稳定性分析表明，重组 酵母菌株在没有选择压力的条件下连续接种培养1##:，未发现重组质粒的不稳定性。 关键词：酿酒酵母，信号肽，分泌表达载体 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） M3$ ) ###12/#@ ## #!2#!012#B 酿酒酵母（ ）是一种最简单的单细胞真核生物。它和人类关系 !##$%’(#)* #)%)+,*,) 密切，没有内毒素，无致病性，长久以来被用于面包和制酒工业，被美国食品和药物管理局 （ ， ）确认为一种安全（ ）生物，用它表达的药物不需要 NO 6O L8*+ )O577,-86-7 NL) PJ)G 进行大量的宿主安全性实验。1@$1 年Q7-R456 首次利用酿酒酵母表达人干扰素基因获 ［］ 1 得成功 ，此后又有多种外源基因在酿酒酵母中表达成功。随着对其遗传学和生理特点 的深入了解，特别是其基因组测序完成之后，许多研究者对酿酒酵母表达系统的研究产生 了兴趣。本文把来源于克鲁维酵母（ ）的菊粉酶基因的信号肽序列 -./(+)%’(#)* ’0,1/* 用于构建酿酒酵母附加型分泌表达载体，得到一种高效的分泌表达系统，目的是研究其在 酿酒酵母中的分泌效果，为理论研究和实际应用提供依据。