抗体在PRRSV感染PAM中的作用.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集 击是 PRRS 疫苗研究的一个难题。 本研究所构建的重组病毒既包含有变异 PRRSV 的免疫原性基因也包含有非变异 PRRSV 的免疫 原性基因，能同时预防变异和非变异的 PRRSV 感染，为 PRRS 疫苗的研制提供一种新的思路。 参考文献（略） 抗体在 PRRSV 感染 PAM 中的作用 杨青原，秦运杰，王冬梅，杜东颖，夏平安，杨明凡 （河南农业大学牧医工程学院兽医微生物实验室，河南郑州，450002 ） 摘 要 （目的）本试验通过研究IgG 对PRRSV 的增殖情况的影响，来探讨抗PRRSV 特异性和PRRS 非特异性抗体 在PRRSV-ADE 中的作用。（方法）本研究分别将抗PRRS 特异性IgG （2.64mg/ml ）和非特异性IgG （2.63mg/ml ）作 倍比稀释，与等体积含200 TCID50/100μL 的PRRSV Hn-1/06 株病毒液混合，制备成一系列的感染性免疫复合物（PRRSV- IgG ）和阴性抗体-病毒混合液（PRRSV+IgG ），接种PAM 细胞；同时将纯化的猪阴性IgG （2.63mg/ml ）和兔抗猪IgG （2.64mg/ml ）等体积混合制备免疫复合物（IC ），分别与等体积含200 TCID50/100μL 的PRRSV Hn-1/06 株病毒液混合， 制备成免疫复合物-病毒混合液（PRRSV+IC ），接种PAM 细胞。接种24h 后用实时荧光定量PCR 方法检测PRRSV 的 mRNA 水平。同样的方法，分别将2 倍稀释的PRRSV-IgG ，PRRSV+IgG 和4 倍稀释的PRRSV+IC 接种PAM 细胞， 用实时荧光定量PCR 方法分别检测感染 12、24 、36 和48h 后不同时间段内PRRSV 的mRNA 水平。（结果）结果显 示，一定浓度的PRRS 特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体，在感染48h 时间段内均能极显著促进PRRSV 在PAM 细胞中增殖；而适当剂量的免疫复合物，在感染48h 时间段内也均能促进PRRSV 在PAM 细胞中增殖。（讨论）结果 表明，一定浓度的PRRS 特异性亚中和水平抗体和非特异性抗体均能促进PRRSV 在PAM 细胞中增殖，但是不同特性 的抗体对PRRSV 的增殖能力存在着差异。 关键词 PRRSV ；免疫复合物；抗体；ADE ；PAM 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS ）是由猪繁殖与呼吸 综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV ）所引起猪的一种高度接 触性传染病，以母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道障碍为主要特征的传染病[1] 。PRRSV 该病毒属于动脉 炎病毒科、动脉炎病毒属，单股正链 RNA 病毒，在体内主要感染感染单核细胞和巨噬细胞，造成免 疫抑制；在体外主要感染 PAM 细胞和非洲绿猴肾细胞系如 Marc-145 细胞，具有很强的细胞嗜性。多 数病毒感染宿主细胞，第一步是病毒吸附于细胞表面，主要通过病毒表面蛋白和靶细胞膜上的特异性 受体或复合受体蛋白的相互结合介导的。然而病毒表面蛋白的特异性抗体通常能够阻抑这一步骤，使 病毒丧失感染宿主细胞的能力，这种现象称为抗体的“ 中和作用”。但是在一些情况下，特异性抗体能 够通过 Fc 受体介导病毒进入靶细胞，增强病毒感染能力，该现象称之为病毒感染的抗体依赖性增强 [2] 作用（Antibody-dependent enhancement,ADE ） 。大量研究资料表明 PRRSV 感染 PAM 细胞是通过 特异性受体或复合受体调节进入的，研究还发现在 PRRSV 感染宿主细胞的过程中，亚中和剂量的特 异性抗体能够增强PRRSV 的感染力。但在猪体内同时也存在一些PRRS 非特异性抗体和免疫复合物， 而关于这些非特异性抗体和免疫复合物能否增强 PRRSV 的感染力的研究很少。本试验主要通过研究 不同特性的抗体对 PRRSV 增殖的影响，来进一步探讨 PRRSV 感染的抗体依赖性增强机制。 1 材料 1.1 毒株与实验