北方露地杜鹃DNA的提取.pdfVIP

江苏农业科学 2011年第 1期 一 3l一 张艳红，沈向群，刘旭颖，等 北方露地杜鹃DNA的提取 [J]．江苏农业科学，2011(1)：31—32 北方露地杜鹃DNA的提取 张艳红 ，沈向群 ，刘旭颖 ，赵凤军 (1．辽东学院，辽宁丹东 118003；2．沈阳农业大学园艺院，辽宁沈阳 100161) 摘要：采用改 良CTAB法和改 良SDS法对照 白杜鹃 DNA进行提取，结果表明：改 良SDS方法提取的杜鹃花总 DNA不仅带亮，而且 比改 良CTAB法提取的DNA杂质少；采用幼叶比功能叶提取的DNA质量好。 关键词 ：杜鹃；DNA提取 ；CTAB；SDS 中图分类号：$685．210．1 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2011)01—0031—02 到 目前为止 ，全世界 已知杜鹃花属种类约为 967种 。中 1．2 方 法 国有561种杜鹃，占世界总种数的58％，绝大多数常绿乔灌 1．2．1 杜鹃基 因组 DNA的提取 木型杜鹃在中国，中国是世界杜鹃的原产地和分布中心 。 1．2．1．1 改 良CTAB法 (1)取 7mL离心管，加入 2mL的 一 些学者对杜鹃属(Rhododendron)植物运用分子标记 的方法 2％CTAB提取缓冲液，50 L的巯基乙醇，置于 65℃水中预 进行了一些研究，主要是采用 RAPD技术 、ITS序列 ， 热20min；(2)各取 1g左右新鲜杜鹃叶片 (嫩叶及功能叶)于 顾奇萍等探讨了云锦杜鹃 ISSR扩增条件的优化 。本试验 研钵中，加半勺PVP(约0．1g)，迅速倒入液氮，研磨至粉末 以北方露地杜鹃为试验材料进行 DNA提取，旨在为研究杜鹃 状 ，立即转入预热的7mL离心管中，65℃保温 45min，其 问 的遗传变异奠定基础。 每隔10lnin左右混匀 1次 (轻轻颠倒数次)，取出样品冷却至 室温。(3)加入等体积(2000tzL)氯仿 一异戊醇 (体积比为 1 材料与方法 24：1)的混合液，轻轻振荡混匀，12000r／rain离心 15min 1．1 材料 (不低于 l5℃，否则CTAB会沉淀)。(4)取上清转至一新离 1．1．1 植物材料 所用材料为 6个北方露地杜鹃花品种 。 心管中，重复步骤 (3)。(5)取上层水相 lmL，加入 3mL冰 取样时每品种随机选取 l0个单株，每株取 5片幼叶和3片功 冻至 一20℃的乙醇，一20℃下冰冻 2h。(6)挑出白色絮状 能叶，用装了冰的冰盒带回实验室，分别取等量叶片组成混合 物放入 1．5mL离心管中，用600jxL70％的无水乙醇漂洗 2～3 样作为一个样品，于 一20oC低温条件下保存备用。样本编号 次，瞬时离心，将沉淀置于超净工作台风干至透明状。最后，加 如表 1所示 。 入 100IxL超纯无菌水溶解沉淀，置4℃下备用，一20℃保存。 表 1 样 品来源及编号 1．2．1．2 改良的SDS法 (1)取 7mL离心管，加入 2mL的 SDS提取缓 冲液，50 L的巯基乙醇，置于 65℃水中预热 20min。(2)各取 1g左右新鲜杜鹃叶片(嫩叶及功能叶)于研 钵中，加半勺PVP(约0．1g)，迅速倒人液氮，研磨至粉末状， 立即