环介导等温核酸扩增技术快速检测食源性致病菌应用进展.pdfVIP

60 ·综述· 中图分类号：R155．5 文献标识码：A 文章编号：1673—758x(20lO)仇一0060一04 环介导等温核酸扩增技术快速检测食源性致病菌应用进展 李秀桂综述，刘 巍审校 广西壮族自治区疾病预防控制中心(南宁530028) 食源性疾病与食品污染构成了一个巨大并不断 1／2—1／3。直接靠扩增副产物焦磷酸镁沉淀的浊度 扩大的世界性公共卫生问题。已知的食源性疾病大 进行判断是否发生反应。LAMP技术具有高特异性、 约有250多种，主要包括致病菌、病毒和寄生虫导致 高效率和便捷等特点141。 的感染性疾病。据统计，我国1992—2001年食源性 疾病的主要危害为微生物，占38．5％，以沙门氏菌、 复杂。一个反应至少包括4条引物，包括一对内引物 副溶血性弧菌、变形杆菌等为代表引起的感染性疾 病患者是化学污染物引起疾病的2倍Ill。自2002年定了扩增片段的大小范围，同时也为内部引物提供 起，我国建立了国家食源性病菌监测网络，开展监测 了模板，如果再增加一对环引物(100pprimer)，会明 食品中沙门氏菌、出血性大肠0157：H7、副溶血性弧显加快等温扩增的速度，大大提高检测效率，检测率 菌、单核细胞增生李斯特氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色 比没有加环引物的高7个数量级15,61。国外已建立 葡萄球菌、空肠弯曲菌7大类致病菌，为食品安全和 风险评估提供了科学依据。但目前食源性致病菌检 er．Jp／e／)，只要导入靶基因就能自动生成成组引物， 测仍然以传统经典的细菌分离、培养及生化鉴定为 挑选最优组合即可。 主，耗时长，操作繁琐，受环境及主观因素影响大等； 1．3基本操作LAMP等温扩增反应体系包含了引 生化快速鉴定方法和PCR检验等不仅需要价格昂 贵的设备，还需要较高的技术要求和资金投入，制约 本操作过程是将LAMP反应体系(除BstDNA聚合 了现场快速检测及基层实验室普及应用，影响检测 酶)在95℃加热5min，冷却后，加人BstDNA聚合 的时效性和准确性。2000年Notomi等12建立了一种 新的体外扩增特异DNA片段的分子生物学技术。即 温度下加温2min终止反应。 isothermalan卜 1．4 LAMP扩增结果判断扩增产物电泳后在紫外 环介导等温扩增技术(100p—mediated 灯下观察可见梯状条带，或直接用焦磷酸镁对扩增 plification，LAMP)。该技术具有特异性高，等温高效， 敏感性高，操作简便，反应不需PCR仪和特殊试剂， 产物沉淀通过肉眼进行判断或者对其浊度进行检 产物易检测，不需繁琐的电泳，肉眼即可判断等优 测，也可用荧光染料SYBRGreenI染色，在紫外灯或 点；现已广泛应用于对食源性致病菌的检测研究，大 日光下通过肉眼进行判定，如果含有扩增产物，反 GreenI的橙 有成为替代传统PCR检测技术的可能。本文就近年 应混合物变绿；阴性结果则保持SYBR 来LAMP技术在食源性致病菌中快速检测的应用进 展做一综述。 1环介导等温核酸扩增技术(“蚺口) ca“，反应结果在白光下通过肉眼观察绿色钙锰复 合物是否生成进行辨别，比白色焦磷酸镁沉淀更易 1．1 LAMP技术的原理该技术针对靶基因设计4 于判断。 DNA 条特别引物，利用一种链置换DNA聚合酶(Bst