急性心肌缺血早期降钙素基因相关肽和神经生长因子的表达.pdf

  中文摘中文摘 中文摘中文摘 研究目研究目 ：：观察神经生长因子 （NGF ）、降钙素基因相关肽 （CGRP ）在大鼠背根神经 研究目研究目 ：： 节（DRG ）、脊髓和心脏的分布；检测大 鼠冠状动脉结扎后不同时点NGF 、CGRP 及其 mRNA 在 DRG 和心脏的表达变化，以及 段硬膜外麻醉、NGF 受体 （TrkA ）拮抗剂和乳鼠辣椒 素预处理的干预效应 。通过分析 CGRP 和 NGF 表达变化关系，探讨在心肌缺血神经源性 反应中神经肽表达 的调节机制。 研究背景研究背景：：已有的相关研究表明，CGRP 等活性物质参与机体对心血管系统功能的调 研究背景研究背景：： 节。在发生急性心肌缺血时，心肌组织内 CGRP 的含量明显升高，提示 CGRP 参与并影响 急性心肌缺血的病理变化过程， 目前关于其合成与释放的调节机制 尚不明确，其中 NGF 是最重要的调节因子 。 研究内容及方法研究内容及方法：： 研究内容及方法研究内容及方法：： 第一部分第一部分：大鼠：大鼠心脏和背根神经节心脏和背根神经节 CGRP、、NGF 的组织化学研究组织化学研究 第一部分第一部分：：大鼠大鼠心脏和背根神经节心脏和背根神经节 、、 组织化学研究组织化学研究 实验选用雄性 SD 大 鼠随机分为两组：（1）正常对照组 （Normal group ），麻醉后直接 处死；（2 ）结扎冠状动脉组 （CAO group ），单纯扎闭冠状动脉左前降支。每组均为 6 只动 物。采用荧光免疫组织化学和原位分子杂交技术观察结扎冠脉后 30min 大 鼠DRG 、脊髓和 心脏组织 NGF 及其受体 TrkA、CGRP 及其 mRNA 的表达部位；并应用银染法检测心脏神 经组织的分布。 第二部分第二部分：急性心肌：急性心肌缺血缺血大鼠心肌组织大鼠心肌组织和背根神经节和背根神经节 CGRP、、NGF 的表达的表达 第二部分第二部分：：急性心肌急性心肌缺血缺血大鼠心肌组织大鼠心肌组织和背根神经节和背根神经节 、、 的表达的表达 动物随机分为两组：（1）手术对照组 （Sham group），只开胸暴露心脏，不结扎冠脉； （2 ）结扎冠状动脉组 （CAO group ）。每组又分 15min、30min、1h 和 6h 四个时点 （n=6 ）。 通过心电图监测和 TTC 染色判断心肌缺血模型制备成功；采用 ELISA 和实时荧光 Rt-PCR 方法定量检测结扎冠脉后不同时点大 鼠 段 DRG 和缺血心肌组织NGF 、CGRP 及其 mRNA 的表达变化。 第三部分第三部分：胸段硬膜外神经阻滞效应：胸段硬膜外神经阻滞效应的研究研究 第三部分第三部分：：胸段硬膜外神经阻滞效应胸段硬膜外神经阻滞效应 研究研究 动物随机分为三组：（1）手术对照组（Sham group）；（2 ）结扎冠状动脉组（CAO group ）； （3 ）罗哌卡因硬膜外麻醉组 （EA group ）。每组又分 15min、30min、1h 和 6h 四个时点 （n=6 ）。在结扎左冠状动脉前 15min 经 段硬膜外给予 1% 罗哌卡因 120g.kg-1 或生理盐 水。采用 ELISA 和实时荧光 Rt-PCR 方法从蛋白和 mRNA 水平定量分析 段硬膜外麻醉对 NGF 、CGRP 及其 mRNA 表达 的干预效应 。 第四第四部分部分：：TrkA 受体拮抗剂及辣椒素干预效应的研究受体拮抗剂及辣椒素干预效应的研究 第四第四部分部分：： 受体拮抗剂及辣椒素干预效应的研究受体拮抗剂及辣椒素干预效应的研究 1、动物随机分为三组 （n=6 ）：（1）手术对照组 （Sham group）；（2 ）结扎冠状动 脉组 （CAO group ）；（3 ）AG879 硬膜外给药组 （AG879 group ）。在结扎左冠状动脉前 -7 15min 经 段硬膜外给予 AG879 （10 mol/L ）或生理盐水。2 、动物随机分为 四组 （n=6 ）：