牛输卵管上皮细胞的纯化培养与生长特性研究.pdfVIP

2011每 藕47拣 麓5鬻 ReproductionandPhysiology ·繁 疆 牛输卵管上皮细胞的纯化培养与 生长特性研究 吕自力 ，石 国庆 ，王 亮 (1．石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000； 2．新疆农垦科学院畜牧兽医所 ，新疆石河子 832000； 3．中国科学院新疆理化技术研究所 ，新疆乌鲁木齐 830011) 摘 要 ：研究依据牛输卵管上皮细胞与成纤维细胞对EDTA／胰酶消化敏感性不 同，分离纯化牛输卵管上皮细 胞 ，并以其进行生长曲线和细胞凋亡趋势的研究。结果表明：荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞在DMEM ／F12培养基 中生长旺盛 ，第 3代细胞在 2．5X10个细胞 ／孔 的起始浓度下，生长周期 明显，7d左右可以达到 100％~I2合 。第 11 代细胞达到 100％汇合的时间较第3代细胞延长3d左右，细胞 出现滞长现 象。用膜联蛋白V—FITC／PI双标记流 式细胞术检测输卵管上皮细胞凋亡，发现输卵管上皮细胞在生长期细胞凋亡速度慢，在接触生长期 中短期 内饥饿 培养对凋亡影响不大。9代以前细胞凋亡率每代增加约 1％左右 ，但 9代后凋亡率明显加快，在9代时为 15．5％，11 代时已经达到了20．7％，13代为 26．4％。因为细胞凋亡时细胞 的核质 出现退化 ，提示 以输卵管上皮细胞作为核移 植供体材料或建立早期胚胎发育的共培养体系时，应该使用 10代以前的细胞为宜。 关键词 ：输卵管上皮细胞；细胞培养；细胞凋亡；牛 中图分类号：$823．3 文献标识码 ：B 文章编号 ：0258—7033(2011}o5一oo19—05 体细胞核移植技术是以高度分化的体细胞作为 不 同于胚胎细胞核移植技术 ，胚胎细胞核移植技术 核移植供体进行的一项复杂的动物繁殖新技术。它 所用的供体细胞是一种多能干细胞 ，它本身具有分 化成 3个胚层的潜能。Willmut等Ⅲ利用成年绵羊乳 收稿 日期 ：2010—07—15；修回日期 ：2010—12-15 腺细胞克隆出绵羊 “多莉 ”以来 ，目前已利用卵丘细 资助项 目：国家 “十一 五”(2006BAD01A11)；科技 部 863项 目 胞 、睾丸支持细胞 、胚胎干细胞 、胎儿成纤维细胞 、 (2008AA101011)；科技部 自然基金 ；农业部资助项 目 (nycytx一40—06)；农业部资助项 目(2009ZX08008—001B) 神经细胞 、卵泡上皮细胞 、性腺组织细胞 、尾尖成纤 作者简介：吕自力 (1971一)，男，副研究员 ，博士研究生 维细胞和淋 巴细胞等克隆出小鼠_2]。在牛 的克隆方 通讯作者 QuantitativeStudiesonExpressionLevelofFTHandEightESTsmRNA intheOvariesofZiGeese KANGBo，JIANGDong—mei，LIUBen-jun，YANGHuan-min (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，SichuanAgriculturalUniversity，SichuanYaan625014，China； 2．HeilongjiangVocationalCollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryScience，HeilongjiangShuangcheng150111， China；3．CollegeofAnimalScienceandTechnology，HeilongjiangAugustFirstLandReclamationUniversity， Heil