猕猴艾滋病模型EKM基因治疗效果观察.pdfVIP

Feb．2011,31(1) 实验动物与比较医学 LaboratoryAnimalandComparativeMedicine 43 doi：10．3969~．issn．1674—5817．2011．01．009 猕猴艾滋病模型EKM 基因治疗效果观察 陆彩霞，高家红，江勤芳，孙晓梅，代解杰 (中国医学科学院／北京协和医学院 医学生物学研究所 昆明650118) [摘要] 目的 明确体外导入EKM基因的实验猕猴感染SHIV．KB9后，病毒复制和免疫反应情 况，为基因治疗AIDS提供实验依据。方法 用血清学方法筛选出无SIV、STLV、SRV／D和B病 毒感染的猕猴7只，实验当天回输 自体储备血75ml，同时采集猴外周血75m1进行CD4+T细胞分 离培养，并导入EKM基因，培养结束后收获细胞，静脉回输猴体后再进行SHIV—KB9感染。采用 流式细胞术、血常规检测、病毒栽量检测和基因拷贝数检测的方法确定导入基因后的实验猕猴感 染SHIV．KB9后体内病毒复制和免疫损伤情况。结果 导入基因和回输细胞的实验猕猴其血浆病 毒载量峰值都与已报道的推迟 14d出现，比模型对照组推迟 11d出现，血浆病毒载量峰值均比模 型对照组峰值低。流式细胞术结果表明其CD4+T细胞计数也稳定在一定水平，CD4／CD8比值未 出现明显倒置。实验组猕猴在试验结束时均未发展为猴AIDS。结论 自体回输导入EKM基因的 CD4+T细胞的猕猴AIDS模型其血浆病毒载量峰值与模型对照组峰值比较有迟后作用，且低于模 型对照组峰值，与回输细胞的实验对照组没有明显区别，其更确定的效果还有待进一步的研究。 [关键词】EKM基因；艾滋病；实验猕猴；SHIV—KB9 [中图分类号]R322，Q95—33 [文献标识码】A [文章编号]1674—5817(2011)01—0043—05 艾滋病(AIDS)是 21世纪危害人类健康和生命 等。基因治疗通过在缺乏长期化学治疗的情况下持 最严重的病毒性疾病之一，目前排在心脏病、中风 久干扰病毒复制，阻止HIV感染进程提供了希望3『1。 和呼吸系统疾病之后，是世界第四大致命疾病…。目 SHIV病毒艾滋病动物模型是 目前国外内艾滋病模型 前预防和治疗AIDS的方法有DNA疫苗或佐剂疫苗， 研究的趋势，该模型被认为是比现阶段普遍运用的 高效抗逆转录病毒治疗(HAART)等 。但艾滋病疫苗 SIv模型针对性更强、更有意义的动物模型，在 到 目前为I卜尚未有可确信的效果，HAART在减轻病 SHIV病毒艾滋病动物模型开展基因治疗研究将对后 毒血症和降低与AIDS相关的死亡率方面发挥 了积 续的基因治疗AIDS奠定实验基础，具有重要意义。 极作用，但长期使用HAART在有些病例中已报道有 本研究中所用EKM基因，具有核糖核酸内切酶活性， 副作用，比如毒力变异和耐药H1V株的产生，因而寻 可特异性切除ssRNA5’端的ACA序列，其表达系统可 找一种在治疗过程中不产生主要副作用又能抵抗HIV 被人免疫缺陷病毒 (HIV)表达的Tat蛋 白诱导。 感染的新的治疗方法 已迫在眉睫f21。基因治疗AIDS 是近年来研究的热点，治疗的靶标集中在病毒生活史 1 材料与方法 的各个环节，如阻断HIV病毒与细胞表面受体结合；阻 断病毒RNA反转录为DNA；扰乱病毒蛋 白的包被 1．1 实验材料 1．1．1 实验动物 选用本研究所全国医学灵长类中 收【稿 日期】2010—03—08 心 自繁猕猴7只，体重3．5～4kg[SCXK(滇)2005— 【基金项 目】中日合作项 目 “艾滋病基因治疗猕猴效果评价” 00041。实验前经血清学问接免疫荧光抗体检查法 作【者简介】陆彩霞(1979一)，女，研究实习员，研究方向：实验动 物及