类人胶原蛋白生物相容性实验研空.pdfVIP

维普资讯 西北大学学报(自然科学版) 2004年2月，第34卷第 1期，Feb．，2004，Vo1．34，No．1 JournalofNorthwestUniversity(NaturalScienceEdition) 类人胶原蛋 白生物相容性实验研究 米 钰 ，惠俊峰 ，范代娣 ，刘欢乐 (1．西北大学 化工学院，陕西 西安 710069；2．西安油脂化工总厂，陕西 西安 710069) 摘要：目的 为扩大类人胶原蛋 白的应用，评定和比较猪胶原蛋 白、类人胶原蛋白和明胶在动物体 内的生物相容性 。方法 分别用胶原材料和明胶进行 以下生物学测试 ：急性毒性试验、溶血试验、 热原试验、皮肤刺激试验。根据标准对试验数据进行分析和评估。结果 类人胶原蛋 白的急性毒 性试验、溶血试验、热原试验、皮肤刺激试验均为阴性。结论 材料生物学测试结果显示类人胶原 蛋白较其他两种材料的生物相容性更高，是理想的医用生物材料。 关 键 词 ：胶原蛋 白；类人胶原蛋 白；明胶 ；生物相容性 中图分类号：TQ936．2 文献标识码：A 文章编号：1000—274X(2004)01-0066-04 胶原是一种广泛存在于有机体 中的结构蛋 白 过猪胶原受热水解得到的明胶 ；将猪胶原用生理盐 质，是皮肤 、软骨 、动脉血管壁及结缔组织的主要成 水在 37℃水浴浸提 30min，制成浸提液 。 分。胶原分子是 由3条螺旋型的肽链相互盘绕而 1．2 实验方法 成。 目前 ，胶原蛋 白已广泛地应用于医药工业 、食品 1．2．1 急性毒性试验 健康小白鼠，体重20g左 工业 、日用化学 品工业、生物合成及胶原修饰等领 右，随机分组 ，每组 5只，记录初始体重。通过小 鼠 域 。胶原蛋白的来源主要分为两类 ：一是从动物 尾静脉分别注射水溶性类人胶原蛋白、明胶溶液 、猪 结缔组织中提取 ；二是通过基 因工程菌高密度发酵 皮胶原蛋 白浸提液和生理盐水 ，每只小 白鼠注射量 获得。动物体胶原蛋 白是一种硬蛋白，不溶于水 ，具 为 1mL，分别于注射后24，48和72h称量，观察反 有极大的伸展性 。当胶原受热分解时，3股螺旋结 应 ，记录结果。 构分开，变成水溶性明胶分子。本实验室利用基 因 1．2．2 溶血试验 健康成年 中国大 白兔 ，体重 工程技术生产的类人胶原蛋白高分子材料 (Human— 2．5～3．0kg，采血20mL，加20％草酸钾 1mL制成 likecollagen，简称 HLC)具有水溶性、低免疫排异反 抗凝兔血。取8mL抗凝兔血加生理盐水 10mL稀 应等特性，具有作为生物医用材料的潜力。本文主 释。取试验材料猪皮胶原的浸提液 、类人胶原和明 要通过动物实验对猪皮提取胶原蛋 白、类人胶原蛋 胶溶液及蒸馏水 (阳性对照)、生理盐水 (阴性对照) 白和明胶三者的生物相容性进行了比较 ，以便对类 各 10mL于试管内，重复 3份。放入 60℃水浴 中， 人胶原蛋 白进行初步的生物学评价。 预热60rain。每个试管再加入 0．2mL稀释抗凝兔 血，于37℃水浴 60min，750g离心 10min，取上清 1 材料与方法 液。用分光光度计在 545nm波长测上清液 的吸光 度值 (A)，取平均值。计算各材料 的溶血率，计算公 1．1 试验样品的制备 式 ：溶血率 (％)=(材料组吸光度一 阳性对照组吸 本实验室构建的基 因工程菌经发酵得到水溶性 光度)／(阴性对照组吸光度一 阳性对照组吸光度)。 类人胶原蛋 白；猪胶原蛋白由鲜猪皮经酶解提取 ；通