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高温乳糖酶基因在大肠杆菌中的高效表达_陈卫.pdf
12 5 : 8 Vol1 12, No1 5: 8
2002 10 Oct12002
016, 10min, 50ml 5000r/ min 4e 5min, ,
80ml TB( 10mM Hepes, 55mM Mn- , PCR ,
Cl , 10mM CaCl , 250mM KCl, MnCl 5N KOH pH DNA Pfu DNA ,
2 2 2
61 7) , 10min, 5000r/ min 4e 10min, DNA , E3
20ml TB , DM O 7% , DNA PCR
10min , DpnÑDpnÑ
1121 21312 : , DNA , 5. - Gm6ATC- 3.
, 200Ll , Dpn Dpn Ñ, ,
ÑPCR 10Ll( PCR Dpn Ñ
) , ,
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800Ll OC, 37e 1h( 250r/ min) , 200Ll , ,
Amp ( 200Ll OC
) , 37 e , 1@
[ 3] 8
1121 3 10 / Lg DNA ,
11214 ,
1121411 : , hAd- 5 105% OAV 114%
LB , 37 e 16~ BAd3 34446bp, E3 115kb, hAd5 E3
20h, , 30L1 2 @ , BAd- 3 E3 ,
[ 100mmol/ L NaOH, 5mmol/ L EDTA pH810, 015% (w/ v) CAV- 2 31323bp, E3
D , 01 025% , 5% ] , , 115kb, , 4017kD
[ 8]
5min, , CAV- 2 Toronto A26/ 61,
1121412 : E3 ORFs, CAV-
, 3ml LB , DNA 1 2 E3 , , CAV
~ 2 , - 2 E3 CAV- 2
, , hAd- 5 105%
, , CAV- 2 115kb DNA
2 , ,
211 CAV- 2 E3 区的克隆 E3 , E3 114kb
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( + ) K
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