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第 44 卷 第 4 期 ( ) Vol. 44 No. 4
复 旦 学 报 自然科学版
2005 年 8 月 Journal of Fudan Universit y (Natural Science) Aug. 2005
文章编号 : (2005)
水稻蛋白质激酶 CK2 催化亚基的表达和活性测定
俞 芳 ,朱 炎 ,忻 骅 ,曹凯鸣 ,董爱武
(复旦大学 生命科学学院 生物化学系 ,上海 200433)
( α)
摘 要 : 用 RTPCR 的方法分离到了水稻蛋白质激酶 CK2 催化亚基 OsCK2 的cDNA ,通过大肠杆菌高效表达
α α
系统表达了 OsCK2 ,并利用亲合层析的方法纯化了重组蛋白质 GSTOsCK2 . 得到的大肠杆菌重组蛋白质 GST
α
OsCK2 能够体外磷酸化 CK2 的常用底物酪蛋白 ,并且该磷酸化反应能够被 CK2 的特异性抑制剂肝素所抑制 ,
α
研究表明重组 CK2 具有典型的蛋白质激酶 CK2 的活性 ,为研究水稻 CK2 及其底物的功能奠定了基础.
关键词 : 水稻 ; 蛋白质激酶 CK2 ; 表达 ; 纯化 ; 活性测定
中图分类号: Q 943. 2 文献标识码 : A
蛋白质磷酸化是生物体内蛋白质功能调节的重要方式. 在细胞内 ,蛋白质的磷酸化是由多种蛋白质激
酶参与 ,它控制着细胞的生长、代谢和分化. 蛋白质激酶 CK2 (casein kinase 2) 是细胞内具有多种重要功能
的主要蛋白质激酶之一1 .
CK2 是一种真核细胞中普遍存在的高度保守的信使非依赖性的丝氨酸/ 苏氨酸蛋白质激酶. 它所识
( )
别的磷酸化位点 S/ T 位于多个带负电荷的氨基酸残基 酸性或磷酸化氨基酸残基 中 ,其最小的保守识别
( )
序列为 S/ TXXE/ D/ Sp/ Yp X 表示任意氨基酸残基, p 表示磷酸化的氨基酸残基 ,识别位点附近负电
荷氨基酸残基的存在可提高 S/ T 的磷酸化效率. 蛋白质激酶 CK2 全酶一般是由两个催化亚基 α和/ 或
α β 1
′、两个调节亚基 构成的不均一四聚体 .
( )
在植物体内 ,CK2 参与了许多植物体特有的生物学过程. 在烟草中 ,脱落酸 Salicylic Acid ,SA 通过
as1 类似元件激活基因转录 ,而 CK2 的特异性抑制剂可以减弱 SA 对基因转录的激活2 . 通过对高度同步
化的烟草 B Y2 细胞不同细胞周期 CK2 活性的检测发现 ,在 G1/ S 和 M 期 CK2 活性最强 ,推测 CK2 可能
在烟草 B Y2 细胞 G2 期到 M 期的转变过程中起了重要作用3 . 在拟南芥中反义表达 CK2 基因发现由于
CK2 表达量的下降造成了光调节基因表达量的变化而且还影响了植株的生长4 . 另外在拟南芥中还发现
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