酶法水解L-苯丙氨酸菌体蛋白工艺探讨.pdfVIP

1．4实验方法 1．4．1产酶菌液对菌体蛋白水解作用 1．4．1．I产酶菌液培养与制备 菌株L-801，32-A于37℃，250r／miI1发酵培养36h后，分别用定性的酶活 鉴定板和定量的福林试剂法测定两种发酵液蛋白酶活，然后将两种发酵液分别 加入麸皮进行1：1的固体吸附。 1．4．I．2菌液对菌体蛋白的作用 先用NaCO。调菌体蛋白的pH至碱性，然后取一部分固体吸附样于40℃烘干 后，以209与lOOg菌体蛋白混匀水解；另取一部分湿吸附样409与lOOg菌体 蛋白混匀水解：分别测定其氨氮含量、含水量及pH。 1．4．2酸性、碱性蛋白酶对菌体蛋白的水解作用 酸性、碱性蛋白酶均配制成1000u／mI的酶液，各取lOOg湿菌体蛋白加入 10ral蛋白酶液，搅拌均匀，3h后取样，测定其氨氮含量、含水量及pH。 1．4。3碱性蛋白酶对调碱性后的菌体蛋白作用 以50u／ml碱性蛋白酶液与麸皮1：1吸附后为碱性蛋白酶样品，再取lOg 碱性蛋白酶样品加入509菌体蛋白，搅拌均匀，于40℃烘干即可，测定其氨氮 含量、含水量及pH。 1．4．4酶加入量对菌体蛋白水解影响 湿菌体蛋白按不同比例直接加入酸性蛋白酶，搅拌均匀，于40℃烘干，即 可取样，测定其氨氮含量、含水量及pH。 2．结果与分析 2．1菌体中蛋白含量测定结果 经测定湿茵体的蛋白含量约20％，水分含量60。75％左右；烘干后蛋白含量 75％’80％。 2．2产酶菌液对菌体蛋白的水解作用 实验结果表明：两种产酶菌液均无酸性蛋白酶，而菌株L-801的碱性蛋白酶 酶活50。100u／mI，对菌体蛋白有一定的水解作用。 2．2酸性、碱性蛋白酶对菌体蛋白的水解作用 酸性、碱性蛋白酶均配制成1000u／ml的酶液后，对菌体蛋白效果如下： 表1酸性、碱性蛋白酶对菌体蛋白的水解作用 从表1可知，碱性蛋白酶在酸性条件下，失去酶活力，以致于没有作用效 果，而酸性蛋白酶作用菌体蛋白，氨氮含量则提高了60170％。 2．3碱性蛋白酶对调碱性后的菌体蛋白水解作用 菌体蛋白调pH至碱性后，碱性蛋白酶样品加入菌体蛋白并烘干，其结果见 表2： 表2碱性蛋白酶对调pH后的菌体蛋白作用效果 碱性蛋白酶于pHI 时，菌体蛋白由黑灰色变成红褐色：从表2看，调pH后．菌体蛋白的氨氮含量 提高了两三倍，但碱性蛋白酶样品对菌体蛋白没有水解作用． 2．4酸性蛋白酶加量对菌体蛋白水解影响 据上，酸性蛋白酶具有明显的水解作用，不同的酸性蛋白酶加量对菌体蛋白水 解影响，见表3。 表3酸性蛋白酶加入量对菌体蛋白水解影响 项目 pH 氨氮惹毗 水分x 氨氮繁叫g 菌体蛋白 2．92 0．89 66．2 2．65 酸性蛋白酶25u／g 2．99 0．98 67．2 2．99 酸性蛋白酶50u／g 3．06 1．15 67．1 3．51 酸性蛋白酶lOOu／g3．16 1．60 63．7 4．41 酸性蛋白酶200u／g3．23 1．83 63．1 4．95 80 ∽ ’、 ∞ _ 劬哪 摆 J嘁 o 2004006=ZOOi．．)O1600 酶刁口入-el-u／g 酸性蛋白酶加入量对菌体蛋白 作月日交蜾 注：25u／g指19菌体蛋白加入25u的酸性蛋白酶，以此类推。 酸性蛋白酶在pH3．5，40℃条件下酶活为45000u／g。从图中可以看到，随 着酶加入量的增加，水解产物中氨氮含量呈递增状态，pH也相应的有递增趋势， 在酸性蛋白酶加入量1250u／g时，氨氮含量提高了两倍，超过加入量1250u／g，