电纺纳米纤维膜固定化漆酶去除土壤中多环芳烃研究.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2011 暨第六届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 电纺纳米纤维膜固定化漆酶去除土壤中多环芳烃的研究 代云容，丁士元，牛军峰* (北京师范大学环境学院，水环境模拟国家重点实验室，北京，100875； *联系人，E-mail：junfengn@bnu.edu.cn) 1. 引言 多环芳烃（PAHs ）作为土壤中一类典型的持久性有机污染物，严重威胁着土壤生态功能、农 产品质量和人类健康。酶降解是一种有效的去除土壤中 PAHs 的方法，但是由于游离酶易失活， 导致修复成本高，限制了酶降解在实际中的应用。固定化酶是改善酶稳定性和重复使用性的有效 手段。乳液电纺是一种新型高效的固定化酶技术，它能通过直接电纺油-水或者水-油乳液制备壳- 核结构载酶纳米纤维，实现对酶的原位包埋固定。本文选用可生物降解高分子外消旋聚乳酸 (PDLLA)作为原材料，利用乳液电纺技术将漆酶包埋固定在纳米纤维中，研究了电纺纳米纤维膜 固定化漆酶对土壤中PAHs 菲、荧蒽、苯并[a]蒽和苯并[a]芘的去除性能，并对其去除机理进行了 初步探讨。 2. 材料与方法 2.1 材料及仪器 外消旋聚乳酸(PDLLA)(济南岱罡生物科技有限公司) 分子量为 10 万。漆酶、2,2-连氮基-双-(3- 乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸) （ABTS ）和异硫氰酸荧光素（FITC ）购于 Sigma。乳化剂 F108 由 BASF 提供。菲、荧蒽、苯并[a]蒽和苯并[a]芘均为分析纯(Aldrich chemical Co.) 。所用试剂甲醇和 二氯甲烷均为色谱纯。主要仪器包括日立 S-4800 型场发射扫描电子显微镜(FESEM ）、蔡司LSM510 型激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)、加速溶剂萃取仪(ASE)、瓦里安 Cray 50 型紫外分光光度计以 及实验室自制高压静电纺丝装置。采用戴安 U3000 型高效液相色谱(HPLC)分析 PAHs 。 2.2 电纺纳米纤维膜固定化漆酶的制备及活性测定 称取 2 g 聚乳酸溶于 20 g 二氯甲烷，向溶液中加入 0.2 g F108，室温下搅拌 3 h 得到澄清的 溶胶。然后向溶胶中加入 1 mL 漆酶溶液(20 mg/mL)，将该溶液混合以得到均质乳液。最后将乳 液引入玻璃注射器中，设定接收距离为 13 cm，施加电压为 12 kV 进行纺丝，控制纺丝流速为 1.5 mL/h ，经4-5 小时后得到载酶电纺纳米纤维膜。将膜剪成 2 cm × 2 cm 小片，取 5 片加入 5 mL 浓 度为 0.5 mmol/L 的ABTS 溶液中反应 5 min 后用紫外分光光度计测定酶活。 2.3 土壤中 PAHs 去除实验 称取 5 g 土样加入锥形瓶中，再加入 25 mL 浓度为 500 μg/L 的4 种多环芳烃混合溶液，在室 温下以 120 r ／min 条件振荡混合 12 h。然后再向水土混合液中加入0.2 g （2 ×2 cm，约 5 片）载 酶电纺纳米纤维膜，并在 6 h、12 h 和 24 h 时分别对溶液、膜和土壤中的菲、荧蒽、苯并[a]蒽和 苯并[a]芘进行测定分析。其中膜上 PAHs 采用乙腈进行洗脱，土壤中的 PAHs 采用 ASE 提取，然 后用 HPLC 测定。同时利用灭活的载酶电纺纳米纤维膜进行吸附对照实验。 3. 结果与讨论 图 1 显示了载酶聚乳酸电纺纳米纤维膜的 SEM 图像和LCSM 图像。从图 1a 中可以看到，载 酶聚乳酸电纺纤维任意排列，纤维的直径分布为几百纳米到几微米，多数直径为 400～600 nm 。 纤维呈现出多孔结构，纤维表面存在大量的孔隙，如图 1b 所示。在激光共聚焦扫描电子显微镜下 观察载有 FITC 标记漆酶的电纺纳米纤维膜，发现大多数纤维呈绿色（如图 1c 所示），证明漆酶 确实被包埋固定在纤维里，且分布比较均匀，说明乳液电纺是一种高效的酶固定化技术。 相对于游离漆酶，电纺纳米纤维膜固定化漆酶的酶活保持率高于 67% 。固定化漆酶较高的酶 活保持率与载酶纤维的壳-核结构有关。将酶包埋在纤维的核部分，可以保护漆酶免受外界不良因 223 持