骨骼肌卫星细胞体外培养及其肝细胞生长因子体外刺激激活研究.pdfVIP

／＼／ ＼／r、 i 网眸与前瞻 生命科学领域青年科学家年会·2007 r、]L＼卜rr1 L，＼1 l 曩第五届北京生命科学领域联合年盒 ， 十 ，m‰‰#％目^”《㈣h㈨m㈣0。m☆…。。。L+‰…山_“∽…^…‰；上．…。一#。。▲㈣一，j‘。m‰k。‰“。t一。^。…。。^…“。。“。k㈣。∞翻 …一…～～∑：e)金爱泛==x二≥乙。仁波。。。(二■ 骨骼肌卫星细胞体外培养及肝细胞生长 因子体外刺激激活的研究 ——许家林朱大海—— 中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院 【摘要】 运动性骨骼肌损伤是运动过程中常见的微细损伤，在进行不 熟悉体育运动．高强度训练或离心运动时易发生，引起肌纤维损 伤．延迟性肌肉酸痛或功能障碍等．导致运动能力下降；不仅如此． 日常生活中也常有运动性骨骼肌损伤产生。研究认为，骨骼肌对 运动性损伤具有修复能力，由骨骼肌卫星细胞介导完成。卫星细 胞是存在于肌肉中的一种成体干细胞．位于肌纤维膜和基膜之间． 正常情况下处于静止状态，当受到肌肉损伤等刺激时被激活．增殖 后移行至损伤部位．与残存肌纤维愈合，重新合成构成肌肉的各种 蛋白，连接到断裂的纤维蛋白上．修复损伤。研究认为肝细胞生长 因子IHGF)是唯一能激活骨貉肌卫星细胞的生长因子。本研究 利用骨骼肌卫星细胞体外培养的实验方法．观察HGF对静止期卫 星细胞细胞周期的影响，验证HGF在体外可以激活卫星细胞．为体 内激活卫星细胞寻找一条合适的途径。 【实验方法l 无菌提取大鼠后肢肌肉，剔除肌肉筋膜．脂肪、血管和神经等， 0．5％胶原酶和0．1％胰蛋白酶消化．利用卫星细胞和成纤维细胞 7贴壁速度的不同纯化细胞．结蛋白染色检测卫星细胞纯度。对原 代培养细胞进行传代，对传至第3代的细胞进行60小时0．5％胎 牛血清饥饿，使细胞同步化于GO期；然后用20ng／mlHGF刺激， 分别在刺激后2小时．4小时．6小时．8小时．10小时用流式细胞 仪检测各时间点细胞周期的周期相。 【结果】 ／ 1．结蛋白染色显示卫星细胞纯度达到96．5％；2．0．5％血 ／ 清饥饿60小时，细胞处于GO期的细胞比例