老阳虚证动物模型建立的实验的研究.pdfVIP

老年阳虚证动物模型建立的实验研究 湖北中医药大学 郝青，吴松，刘建民 指导：王华 【摘要】目的：探讨如何利用青年大鼠建立合适的老年阳虚证模型。方法：选用3月龄SD健康大鼠 30只，雌雄各半，按随机数字表法随机分为青年对照组，亚急性衰老模型组与老年阳虚证模型组，每 组10只。亚急性衰老模型组给予颈背部皮下注射D一半乳糖125mg／k940天，之后于后肢肌肉注射 后再行后肢肌肉注射氢化可的松25mgg连续7天；青年对照组在颈背部皮下及后肢肌肉注射等量生 降低(P0．01)。亚急性衰老组和老年阳虚组大鼠血清中儿_6含量均明显上升，IL一2含量均明显下降 诱导制作的老年阳虚证模型大鼠符合衰老及阳虚的表现，提示以此种方法制作老年阳虚证模型具有可 行性。 【关键词】老年阳虚证；cAMP／cGMP；IL“；IL一2；CD4+／CD8+ 阳虚证为中医基本证型之一，机体随增龄出现阳虚质明显变化为阳虚证的研究提供了思路Ⅲ，随 增龄阳虚证的发生与个体衰老存在密切关联【21。当前从自然的衰老角度探讨阳虚证成为人们研究的重 要课题，其中免疫衰老及炎性衰老的研究已成为新的热点‘41，因此建立符合需要的动物模型对阳虚证 的研究十分重要，自然衰老大鼠基础上实施模型制作固然l合当，但前期至少一年以上的动物饲养成为 建立模型的严重障碍，为此，本实验就如何利用青年大鼠建立合适的老年阳虚证模型进行了探索。 1材料与方法 1．1主要仪器与试剂 FACS Calibur流式细胞仪(美国Becton Arium61 3600 1UF纯水机 KHB—st360型酶标仪(上海)；DHAB电热恒温培养箱(天津)；Sartiruys (北京赛多利斯仪器系统有限公司)；JY1002分析天平(上海)；UV一365紫外分光光度计(日本岛 AdviaCentaur 津)；德国西门子SIEMENS CP全自动化学发光免疫分析仪 8， 武汉滨湖双鹤药业；氢化可的松注射液：上海现代哈森药业；1％肝素：武汉亚法生物技 术有限公司；FITCanti-ratCD3、PEanti—ratCD4、APCanti—rat ELISA ELISA ELISA ELISA Kit、cGMPKit、IL一6 Kit和几一1 均为美国eBioscience公司；大鼠cAMP p Kit：均为谷歌生物科技有限公司；水合氯醛为国产分析纯。 232 1．2实验分组 3月龄SD健康大鼠30只【华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，动物许可证号：SCXK(鄂) Control Model 年对照组(Young group，简写为YC)、亚急性衰老模型组(SubacuteAging group，简 写为SAM)、老年阳虚证模型组(Old controlModel Deficiency Yang group，简写为OYM)，所有大 鼠正常喂养1周后，开始实验处理。 1．3处理方法 1．3．1青年对照组(YC)：正常饲养(以下各组略)，在颈背部皮下及后肢肌肉注射等量生理盐水47 天： 40天，之后于后肢肌肉注射等量生理盐水7天。 再行后肢肌肉注射氢化可的松25mg／kg连续7天m1； 各组大鼠处理结束后，禁食，第二天开始进行相应指标检测。 1．懈采集 1．4．1腹腔注射10％水合氯醛麻醉，用毛细玻璃管从大鼠一侧的眼角动静脉丛眼球采血2mL，常温静置 30min后用离