HPLC法测定枳壳饮片中柚皮苷的含量.pdf

中华中医药学会第六届中药炮制学术会议论文集 中国中医科学院中药研究所炮制研究中心 HPLC 法测定枳壳饮片中柚皮苷的含量 1 1 2 1 江 波 ，石典花 ，袁振海 ，孙立立 （1.山东省中医药研究院，山东 济南 250013 ；2. 山东中医药大学，山东 济南 250014 ） [摘 要] 目的：建立高效液相色谱法测定枳壳饮片中柚皮苷定量分析方法。方法：色谱柱：Lichrospher ODS C18 柱(4.6×250mm，5um), 流动相：甲醇：水=40 ：60 。检测波长：283nm，流速 1.0ml/min，柱温为室 温。结果：在上述色谱条件下，柚皮苷对照品进样量在 16.7～100.2µg/ml 范围内与其峰面积呈良好的线性关 系，r=0.9999 。对照品和样品的精密度试验的 RSD 分别为 0.38%和 0.65% （n=5 ）。对照品和样品的稳定性试 验的 RSD 分别为 0.28%和 0.37%(n=5) 。重复性试验 RSD 为 0.31%(n=5) 。平均回收率为 99.08%，RSD 为 1.37%(n=5)。结论：该测定方法简便易行，结果准确，重复性好，可用于测定枳壳饮片中柚皮苷的含量。 [关键词] 枳壳饮片；柚皮苷；高效液相色谱法；含量测定 枳壳为芸香科植物酸橙及其栽培变种的干燥未成熟果实，为中医临床常用中药；具有理 气宽中，行滞消胀之功效，用于胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停；胃下垂，脱肛， [1] [2] [3] [4] 子宫脱垂 。现代研究表明，枳壳中主要含有黄酮 、少量生物碱 及挥发油 三大类成分， 其中最能体现枳壳特征的成分是黄酮类成分，而黄酮类成分中又以柚皮苷和新橙皮苷相对含 量比较高，药理活性较强，文献报道有 TLC-UV[5]，HPLC[6]测定枳壳中柚皮苷含量的方法。 自2000 年版中国药典以来，枳壳药材含量测定项下采用 HPLC 测定柚皮苷的含量来控制枳壳 药材的质量，但枳壳饮片质量标准尚未建立。为此，我们用 HPLC 法对枳壳饮片中柚皮苷的 含量测定进行了系统研究，建立了适用于枳壳和麸炒枳壳的含量测定方法。该法测定结果准 确，重复性好，快速简便，可作为枳壳饮片质量标准的定量分析方法。 1 仪器与试药 1.1 仪器：Waters 高效液相色谱仪，Waters510 型高压液相色谱泵，Waters 2487 双通道紫外检 测器，江申色谱工作站，Waters810RN 手动进样器。德国 Sartorius 10－5 电子天平。岛津 UV-265FM 紫外分光光度计。 1.2 试药与试剂：柚皮苷对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号：722 －8602,供含量测定 用）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为色谱纯或分析纯级试剂。 1.3 供试样品：枳壳、麸炒枳壳购自济南市建联中药店、北京同仁堂中药店和广东普宁中药 饮片厂，为各药店或药厂自制枳壳饮片，经鉴定均为芸香科植物酸橙的干燥未成熟果实。 2 色谱条件的选择 色谱柱：Lichrospher ODS C18 柱（4.6×250mm ，5um ），柱温：室温，流动相：甲醇：水（40 ： 60 ）作为流动相。流速 1.0ml/min，理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于2000 。 3 试验方法与结果 3.1 检测波长的选择：取柚皮苷对照品适量，加甲醇稀释后作为对照品溶液，以甲醇为参比， 用紫外分光光度计在 200～400nm 波长范围内扫描，测定柚皮苷的最大吸收波长为 283nm,故 检测波长选择 283nm.检测波长选择见附图 1。 3.2 流动相的选择：采用不同体系的流动相进行比较试验，结果甲醇-水（40 ：60 ）为流动相 能够很好的分离开枳壳饮片中各色谱峰，且流动相中未有酸、碱成分，对色谱柱损害较小， 故选择甲醇-水（40 ：60 ）作为流动相。 3.3 对照品溶液的制备：精密称取减压干燥至恒重的柚皮苷对照品 15mg，置 50ml 量瓶中，加 甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置 25ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每 1ml 中 含柚皮苷 60µ